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HS CEofix™ - CDT kit pour Beckman Coulter P/ACE™ 5000 series - FR: Manuel d'instruction

40 tests par kit 1 Date 11-Dec-03 - Révision 02 2 Utilisation prévue Le kit est prévu pour la détermination de Tf humaines isoformes de transferrine et la détermination quantitative
QUOTATION
INFORMATION
QUOTATION
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DESCRIPTION TECHNICAL DESCR.
DESCRIPTION

40 tests par kit

1. Date : 11-Dec-03 - Révision :02

2. Utilisation prévue :

Le kit est prévu pour la détermination de Tf humaines (isoformes de transferrine) et la détermination quantitative de CDT (transferrine déficiente en carbohydrate) dans le sérum humain.


3. Principe du test :

Les Tf sont séparées dans un capillaire sous l'influence d'un champ électrique. Des différences du rapport charge à masse résultent en des temps de migration différents

On utilise un détecteur UV qui détecte les Tf à 200nm.

Le kit contient les tampons et le mode opératoire. Les tampons utilisent la technique brevetée du double revêtement dynamique.

La CDT est définie comme le pourcentage de 0-sialo Tf plus 2-sialo Tf par rapport à la somme de toutes les isoformes de Tf.

4. Contenu :

Rinçage :
1x4.2mL eau bidistillée (PN 10-004263)
Conditionnement :
1x4.2mL NaOH 0.2 M (PN 10-004261)
Initiateur :
1x 4.2 mL TRIS phosphate pH 2.0 (PN 10-004264)
Tampon :
3 x 4.2 mL tampon TRIS borate pH 8.5 (PN 10-004262)
Solution Fe
1 x 3.2 mL (PN 10-004265)
Microfioles
50 (PN 10-004246)

5. Configuration de l'instrument :


-Beckman Coulter P/ACE 5000

  • Détecteur UV
  • Logiciel P/ACE station version 1.0.

6. Autres matériaux :


- Fioles (PN 358807)

  • Bouchons (PN 359079)
  • Ressort (PN 338488)
  • Cartouche 100x800 µm ( PN 727610)
  • Pipettes
  • Capillaire 50µM DI x 40 cm vers le détecteur (PN 10-004748 / 844111044)


7. Formation :

L'opérateur doit connaître le fonctionnement et l'entretien de l'instrument (P/ACE 5000).

8. Préparation et stockage des réactifs :



Les réactifs sont prêts à l'emploi. Veuillez stocker le kit et les tampons dans des conteneurs fermés entre 8°C et 30°C jusqu'à la date d'expiration.

Entre les fonctionnements, les fioles des tampons doivent être rebouchés pour éviter toute évaporation.

Si le kit arrive endommagé, veuillez demander son remplacement.


Le kit ne contient pas de composants dangereux.

9. Type d'échantillon :

Les fluides biologiques sont prélevés comme il est usuel pour tous les tests de laboratoire clinique.

On préfère le sérum fraîchement prélevé.

10. Préparation de l'instrument :

Charger l'instrument comme suit :

figure 1

Programmation de l'instrument :

1 figure 2

2 figure 3


3 figure 4


4 figure 5
figure 6


5 figure 7

figure 8


6 figure 9
figure 10


7 figure 11


8 figure 12


ou downloader le programme : CDT.MET

Flamber les extrémités du capillaire pour éliminer le revêtement polyimide sur 2 mm.

11. Préparation de l'échantillon :

Echantillon : 75 µL solution de Fe + 25 µL sérum dans une microfiole et mélanger.

figure 13

12. Manipulations :

Manipulations journalières :

  • nettoyer l'instrument et le manifold de l'interface
  • mettre en place les fioles de rinçage, conditionneur, initiateur et, tampon
  • mettre en place des bouchons propres et secs sur les fioles.
  • Faire tourner les programme  cond.met
    lorsque le système est resté à l'arrêt pendant plusieurs jours (présentation).

figure 14

  • préparer les échantillons
  • placer l'échantillon dans l'instrument
  • Faire tourner le programme "CDT.MET

Fin de la journée :

  • enlever les échantillons

  • Reboucher les fioles de reactifs.

Placement d'un nouveau capillaire

  • Lorsque le capillaire est cassé ou ne fonctionne pas correctement, remplacer le capillaire selon les instructions de l'instrument.
  • Faire tourner le programme  cond.met pour le conditionnement

13. Calibrage :

Le kit n'exige pas de calibrage

L'instrument doit être entretenu et calibré suivant les spécifications de Beckman Coulter.

14. Analyse des résultats :

Cliquer pour voir des exemples.

15. Calcul :

% CDT = somme de % 0-Sialo Tf plus % de 2-Sialo Tf.

% X-Sialo Tf = surface corrigée de X-Sialo Tf par rapport à la somme de toutes les isoformes Tf.

(X= 0, 2, 3, 4, 5 or 6).

16. Imprécision :

Sample

Control

Low

High

Low

High

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Mean

_

0.89

0.68

3.20

_

0.94

0.75

3.59

SD

_

0.06

0.12

0.12

_

0.06

0.07

0.13

CV

_

7.2

18.7

3.9

_

6.6

9.0

3.6

NCCLS EP5-A (N=80) Lanz C., Thormann W. University of Bern Switzerland on P/ACE MDQ

17.Plage de référence :

Chaque laboratoire doit établir sa propre plage de référence en fonction de la population de patients.

figure 15

18. Interférence :
  • Les variantes Tf hétérozygotes, telles que BC Tf et DC Tf sont facilement détectées
    par deux pics d'une surface corrigée d'environ 40%.
  • Une certaine gammapthie monoclonale ou biclonale peut interférer dans la région Tf.

19. Contrôle qualité :

Un contrôle devra être présent lors de chaque essai.

20. Références :

Un contrôle devra être présent lors de chaque essai.

1. Legros F. et al. Carbohydrate-deficient Transferrin Isoforms Measured by Capillary Zone Elelectrophoresis for Detection of Alcohol Abuse. Clin Chem 2002;48: 2177-2186
2. Lanz C. et al. Evaluation and optimization of capillary zone electrophoresis with different dynamic capillary coatings for the determination of carbohydrate-deficient transferrin in human serum. J Chromatogr A 2002; 979: 43-57
3. Legros F. et al. Use of Capillary Zone Electrophoresis for Differentiating Excessive from Moderate Alcohol Consumption. Clin Chem 2003;49:440-449
4. Lanz C, et al. Capillary zone electrophoresis with a dynamic double coating for analysis of carbohydrate-deficient transferrin in human serum. Precision performance and pattern recognition. J Chromatog A 2003;1013:131-474.
5. Ramdani B. et al.Analyte Comigrating with Trisialotransferrin during Capillary Zone Electrophoresis of Sera from Patients with Cancer. Clin Chem 2003;49:1854-1864
6. Carchon H. et al. Diagnosis of Congenital Disorders of Glycosylation by Capillary Zone Electrophoresis of Serum Transferrin. Clin. Chem 2004;50:101-111
7. Lanz C. et al. Capillary zone elctrophoresis with a dynamic double coating for analysis of carbohydrate-deficient transferrin in human serum: Impact of resolution between disialo- and trisialotransferrin on reference limites. Electrophoresis 2003;24: 4272-4281
8. Martello S. et al. Determination of carbohydrate deficient transferrin (CDT) with capillary electrophoresis: an inter laboratory comparison. Forensic Science International 2004; 141:153-157

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