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ANALIS

HS CEofix™ - CDT kit pour Beckman Coulter P/ACE™ 5000 series - ES: Instrucciones de uso

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DESCRIPTION

40 pruebas por kit

1. Fecha: 11-12-03 - Revisión: 02

2. Uso previsto

El kit está diseñado para la determinación de la Tf humana (isoformas de la transferrina) y la determinación cuantitativa de la CDT (transferrina deficiente en carbohidratos) en el suero humano.


3. Principio del ensayo

Las Tf se separan en el interior de un tubo capilar por influencia de un campo eléctrico. Diferencias en la proporción carga/masa dan lugar a diferentes velocidades de migración.

Se utiliza un detector UV que detecta la Tf a 200nm.

El kit comprende los tampones y el método. Los tampones usan la técnica patentada de doble recubrimiento dinámico.

La CDT se define como el porcentaje de 0-sialo Tf más 2-sialo Tf respecto a la suma de todas las isoformas de Tf.

4. Contenido :

Lavados:
1 x 4.2 ml de agua bidestilada (PN 10-004263)
Acondicionador:
1 x 4.2ml de NaOH 0.2 M (PN 10-004261)
Iniciador:
1 x 4.2 ml de tampón TRIS phosphat pH 2.0
(PN 10004264)
Tampón:
3 x 4,2 ml de Tampón TRIS borato pH 8.5
(PN 10-004262)
Solución de hierro:
1 x 3.2 ml (PN 10-004265)
Microviales
50 (PN 10-004246)

5. Configuración del aparato:


- BeckmanCoulter P/ACE 5000

  • Detector UV
  • Versión 1.0 del software para la estación P/ACE.

6. Otros materiales necesarios:


- Viales (PN 358807)

  • Tapones (PN 359079)
  • Muelle (PN 338488)
  • Cartucho 100 x 800 µm ( PN 727610)
  • Pipetasa- Tubo capilar de 50µm ID x 40 cm para el detector (PN 10-004748 / 844111044)


7. Formación:

El operador deberá estar familiarizado con el funcionamiento del aparato (P/ACE 5000) y su mantenimiento.

8. Preparación de reactivos y almacenamiento :



Los reactivos están listos para ser utilizados. Almacene el kit y los tampones en recipiente cerrado, entre 8°C y 30°C hasta cuando indique la fecha de caducidad.

En los intervalos entre cada ensayo, los viales de tampón deberán taparse para evitar la evaporación. Si el kit suministrado presenta algún deterioro, deberá solicitarse la sustitución del mismo.

El kit no contiene sustancias peligrosas.

9. Tipo de muestra:

Los líquidos biológicos deberán ser recogidos según la técnica empleada normalmente para cualquier análisis clínico de laboratorio.

La muestra idónea es el suero fresco recién extraído.

10. Preparación del equipo :

Cargue el equipo como se muestra a continuación:

figure 1

Programación del equipo:

1 figure 2

2 figure 3


3 figure 4


4 figure 5
figure 6


5 figure 7

figure 8


6 figure 9
figure 10


7 figure 11


8 figure 12


O descargue el programa: CDT.MET

Queme los extremos del tubo capilar para eliminar la capa de poliimida en 2 mm.

11. Preparación de la muestra:

Muestra: 75 µl de solución de hierro + 25 µL de suero en un microvial y mezcle.

figure 13

12. Operaciones:

Operaciones diarias:

  • limpie el equipo y la interfaz varias veces
  • coloque los viales de líquido de lavado, del acondicionador, del tampón, del iniciador
  • coloque un vial para desechos
  • coloque los tapones limpios y secos sobre los viales
  • ejecute  cond.met cuando el sistema haya estado varios días sin funcionar (presentación).

figure 14

  • prepare las muestras
  • coloque la muestra en el equipo
  • ejecute el método "CDT.MET

Al final de la jornada:

  • retire las muestras

  • cierre los viales

Colocación de un nuevo tubo capilar

  • Cuando se rompa un tubo capilar o cuando el tubo capilar no funcione correctamente,
    sustituya el tubo capilar, de acuerdo con el manual del aparato
  • Ejecute  cond.met para el acondicionamiento

13. Calibrado :

El kit no necesita ningún calibrado.

El aparato deberá mantenerse y calibrarse siguiendo las especificaciones del Beckman Coulter.

14. Análisis de resultados:

Haga clic para ver unos ejemplos .:

15. Cálculos:

% CDT = suma de % 0-Sialo Tf más % de 2-Sialo Tf

% X-Sialo Tf = área corregida de X-Sialo Tf respecto a la suma de todas las isoformas de Tf.

(X= 0, 2, 3, 4, 5 ó 6).


16. Imprecisión:

Sample

Control

Low

High

Low

High

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Mean

_

0.89

0.68

3.20

_

0.94

0.75

3.59

SD

_

0.06

0.12

0.12

_

0.06

0.07

0.13

CV

_

7.2

18.7

3.9

_

6.6

9.0

3.6

NCCLS EP5-A (N=80) Lanz C., Thormann W. University of Bern Switzerland on P/ACE MDQ

17. Límites de referencia:

Cada laboratorio deberá establecer sus propios límites de referencia de acuerdo con la población de pacientes.

figure 15

18. Interferencias:
  • Las variantes heterozigotas de la Tf, tales como la Tf BC y Tf DC son fácilmente detectadas por la observación de dos picos de aproximadamente un 40% del área corregida.
  • Alguna gammaptía monoclonal o biclonal puede interactuar con la región de la Tf.

19. Control de Calidad:

En cada ensayo deberá incluirse un pool de sueros control o un control comercial.

20. Références :

1. Legros F. et al. Carbohydrate-deficient Transferrin Isoforms Measured by Capillary Zone Elelectrophoresis for Detection of Alcohol Abuse. Clin Chem 2002;48: 2177-2186
2. Lanz C. et al. Evaluation and optimization of capillary zone electrophoresis with different dynamic capillary coatings for the determination of carbohydrate-deficient transferrin in human serum. J Chromatogr A 2002; 979: 43-57
3. Legros F. et al. Use of Capillary Zone Electrophoresis for Differentiating Excessive from Moderate Alcohol Consumption. Clin Chem 2003;49:440-449
4. Lanz C, et al. Capillary zone electrophoresis with a dynamic double coating for analysis of carbohydrate-deficient transferrin in human serum. Precision performance and pattern recognition. J Chromatog A 2003;1013:131-474.
5. Ramdani B. et al.Analyte Comigrating with Trisialotransferrin during Capillary Zone Electrophoresis of Sera from Patients with Cancer. Clin Chem 2003;49:1854-1864
6. Carchon H. et al. Diagnosis of Congenital Disorders of Glycosylation by Capillary Zone Electrophoresis of Serum Transferrin. Clin. Chem 2004;50:101-111
7. Lanz C. et al. Capillary zone elctrophoresis with a dynamic double coating for analysis of carbohydrate-deficient transferrin in human serum: Impact of resolution between disialo- and trisialotransferrin on reference limites. Electrophoresis 2003;24: 4272-4281
8. Martello S. et al. Determination of carbohydrate deficient transferrin (CDT) with capillary electrophoresis: an inter laboratory comparison. Forensic Science International 2004; 141:153-157

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