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ANALIS

Protur™HiSi kit for Beckman Coulter Paragon® Electrophoresis - IT: Istruzioni per l'uso

QUOTATION
INFORMATION
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DESCRIPTION
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1. General

Data: 4-Sett-03 - Revisione: 01
EURO PN 844111009
PN 10-004100
100 test per kit

figure 1

2. Finalità di utilizzo

Il kit è concepito per la separazione elettroforetica delle proteine nelle urine non concentrate.

3. Principio del test

Le proteine in un campo elettrico migrano verso uno dei poli dell'elettrodo a velocità variabili. La migrazione separa le proteine. Al termine della migrazione le proteine vengono colorate con un colorante specifico per l'interpretazione visiva, ovvero il confronto con un tracciato di riferimento conosciuto (controllo).

Per il posizionamento delle frazioni è possibile utilizzare un marker (standard interno).

4. Contenuto

Tampone per equilibrazione (TRIS-borato 0,64 mol/L) 1x200 mL (PN 10-004101)

Tampone per elettroforesi (TRIS-borato 3,2 mol/L ) 1x200 mL (PN 10-004102)

Colorante Protur 1x100 mL (PN 10-004064)

Gel di agarosio: 1x10

Mascherine per campioni - 1 x 10

Contenitore graduato (25 mL) 1x

Assorbenti per mascherina 1 x 10 (19 x 126 mm)

Assorbenti per gel 1 x 20 (83 x 101 mm)

Se si utilizza un marker come standard interno: aggiungere 5 µL di I.S. (riferimento standard interno 10-004109) a 100 µL di urina.

5. Configurazione dello strumento

- Vedere sistema elettroforetico Paragon ® Beckman Coulter

6. Altri reagenti e materiale necessario

- Pipette.

- Cilindro graduato.

- Acqua deionizzata.

- Soluzione alcool-acido

- Soluzione salina

- Sistema elettroforetico Paragon ® Beckman Coulter

Se si utilizza standard interno:

- Marker (standard interno) 1 mL riferimento 10-004109

7. Formazione

L'operatore deve conoscere il sistema elettroforetico Paragon di Beckman Coulter.

8. Preparazione dei reagenti e stoccaggio

Gel di agarosio: solo prima dell'uso rimuovere delicatamente il gel dal contenitore sigillato. I gel devono essere conservati a temperatura ambiente di 8°C a 30°C, fino alla data di scadenza. Temperature o condizioni di conservazione non adeguate possono causare migrazioni atipiche. NON CONSERVARE I GEL IN PROSSIMITÀ DI FONTI DI CALORE. Ad esempio: CRT, computer o strumentazione da banco. NON REFRIGERARE O CONGELARE.

Tampone di equilibrazione Protur HiSi: Pronto per l'uso.

Tampone per elettroforesi Protur HiSi Miscelare 200 mL di tampone con 800 mL di acqua deionizzata.

Il tampone conservato in contenitore chiuso è stabile per 60 giorni.

Soluzione colorante Protur:

- Preparare la soluzione alcool-acido: 500 mL di acqua deionizzata, 300 mL di metanolo, 200 mL di acido acetico.

- Miscelare 100 mL di colorante e 200 mL di soluzione alcool-acido.

Conservare i reagenti a temperatura ambiente

9. Tipologia di campione

Utilizzare urina fresca non concentrata.

10. Preparazione dello strumento

Vedere sistema elettroforetico Paragon®.

Nella stazione contenimento reagenti disporre:

  • contenitore 1: soluzione colorante

  • contenitore 2: acqua deionizzata.

  • contenitore 3: soluzione alcool-acido

  • contenitore 4: soluzione alcool-acido

  • contenitore 5: acqua deionizzata.

RIUTILIZZABILE PER 10 GEL

11. Preparazione del campione

Nessuna preparazione necessaria.

Se si utilizza il marker (standard interno): aggiungere 5 µL di I.S. (riferimento standard interno 10-004109) a 100 µL di urina.

12. Operazioni

Equilibrazione

  • Asciugare il gel e versare 20 mL di tampone di equilibrazione nel vassoietto gel.
  • Posizionare il gel nel liquido, con il lato dell'agarosio rivolto verso il basso.
  • Attendere 30 minuti (non chiudere il contenitore)

Applicazione

  • Asciugare il gel
  • Posizionare la mascherina campioni
  • Dispensare il campione: 5 µL precisi
  • Attendere la diffusione completa del campione nel gel.
  • Rimuovere e smaltire la mascherina

Elettroforesi

  • Versare 45 mL di tampone per elettroforesi in ciascun comparto della cella elettroforetica.
  • Posizionare il gel sul ponte
  • Separare per 25 minuti a 100 volt

Colorazione

  • Trattare il gel come segue:
  • soluzione colorante 10 minuti
  • acqua deionizzata 10 minuti
  • soluzione alcool-acido 1 minuto
  • soluzione alcool-acido 1 minuto ( o più a lungo, finché non si ottiene uno sfondo chiaro)
  • Asciugare la soluzione in eccesso
  • Posizionare il gel nel forno per l'essiccazione (max. 90°C) per completare l'asciugatura.
  • Valutare il gel

13. Calibrazione

Non applicabile.

14. Analisi dei risultati

figure 2

Valutare il gel confrontandolo con un tracciato di riferimento conosciuto (controllo).

15. Calcolo

Non applicabile.

16. Imprecisione

Non applicabile.

17. Range di riferimento

Non applicabile.

18. Interferenze

Nessuna conosciuta.

19. Controllo Qualità

Utilizzare un campione di controllo.

20. Riferimenti

1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme, Italy, June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system  Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988

Brochure:

B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.

B 25a E97

B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.

B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.

B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.

B 39a E96

B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.

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