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ANALIS

Protur™HiSi kit for Beckman Coulter Paragon® Electrophoresis - FR: Manuel d'instruction

QUOTATION
INFORMATION
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DESCRIPTION
DESCRIPTION

1. General

Date: 4 sep-03 - Revision: 01
EURO PN 844111009
PN 10-004100
100 tests per kit

figure 1

2. Utilisation

Le kit s'utilise pour la séparation électrophorétique de protéines dans l'urine non concentrée.

3. Principe de test

Des protéines dans un champ électrique migrent à une vitesse différente vers l'un des pôles de l'électrode. La migration sépare les protéines. Après migration, les protéines sont colorées avec un colorant protéique spécifique pour l'interprétation visuelle et comparaison avec un profil de référence connu (contrôle).

On peut utiliser un marqueur (standard interne) pour localisation des fractions.

4. Contenu

Tampon d'équilibration (0.64 mol/Ltampon TRIS-borate) 1x200mL (PN 10-004101)

Tampon d'électrophorèse (3.2mol/L tampon TRIS-borate) 1x200mL (PN 10-004102)

Colorant Protur 1x100mL (PN 10-004064)

Gels d'agarose: 1x10

Matrices d'échantillon - 1x10

Mesure (25mL) 1x

Buvards pour matrice 1x 10 (19 x 126 mm)

Buvards pour gel 1x 20 (83x101mm)

Si vous utilisez le marqueur en tant que standard interne, ajouter 5 µL de S.I. (standard interne réf. 10-004109) à 100 µL d'urine.

5. Configuration de l'appareil

- Voir Beckman Coulter Paragon® Système d'Electrophorèse.

6. Autres réactifs et matériel nécessaires

- Pipettes

- Eprouvette graduée

- Eau désionisée

- Solution d'alcool acide

- Solution saline

- Beckman Coulter Paragon® Système d'Electrophorèse

En cas d'utilisation du standard interne:

- Marqueur (standard interne) 1 mL de la référence 10-004109

7. Training

L'utilisateur doit bien connaître le système d'électrophorèse Paragon de Beckman Coulter.

8. Préparation et conservation des réactifs

Gels d'agarose: juste avant l'utilisation, retirer le gel de son emballage avec précaution. Les gels doivent être conservés à température ambiante de 8 °C à 30 °C, jusqu'à la date de préremption.

Le non-respect des conditions de température ou de conservation, peut aboutir à des migrations atypiques. NE PAS CONSERVER LES GELS A PROXIMITE D'APPAREILS QUI DIFFUSENT DE LA CHALEUR; p.ex. CRT, ordinateur ou appareil de table. NE PAS REFRIGERER NI CONGELER.

Protur HiSi tampon d'équilibration: PRÊT A L'EMPLOI

Protur HiSi tampon d'électrophorèse: mélanger 200mL de tampon avec 800mL d'eau désionisée. Le tampon est stable pendant 60 jours dans un récipient fermé.

Protur solution de colorant

- Préparer la solution d'alcool acide: 500 mL d'eau désionisée, 300 mL de méthanol, 200 mL d'acide acétique.

- Mélanger 100 mL de colorant avec 200 mL de solution d'alcool acide


Conserver les réactifs à température ambiante

9. Type spécimen


Utiliser de l'urine fraîche non-concentrée

10. Mise en service du système

Voir Paragon® Système d'Electrophorèse

Mettre dans le processeur de rinçage:

  • recipient 1: solution de colorant

  • recipient 2: eau désionisée

  • recipient 3: solution d'alcool acide

  • recipient 4: solution d'alcool acide

  • recipient 5: eau désionisée

REUTILISABLE POUR 10 GELS

11. Préparation de l'échantillon

Pas nécessaire.

Si vous utilisez un marqueur (standard interne), ajouter 5 µL de S.I. (standard interne réf. 10-004109) à 100 µL d'urine.

12. Procédure d'utilisation

Equilibration

  • Sécher le gel et verser 20 mL de tampon d'équilibration dans le fond de la boîte plastique.
  • Placer le gel, le côté agarose vers le bas, sur le liquide.
  • Attendre 30 minutes (ne pas fermer le récipient)

Application

  • Sécher le gel
  • Positionner la matrice d'échantillon
  • Pipetter l'échantillon: 5 µl exact
  • Attendre jusqu'à ce que l'échantillon complet soit diffusé dans le gel
  • Jeter la matrice

Electrophorèse

  • Verser 45 mL de tampon d'électrophorèse dans chaque compartiment de la cuve
  • Placer le gel sur le support
  • Effectuer une séparation à 100 volts pendant 25 min.

Coloration

  • Traiter le gel avec:
  • Solution de colorant 10 min.
  • Eau désionisée 10 min.
  • Solution d'alcool acide 1 min.
  • Solution d'alcool acide 1 sec. (ou plus long jusqu'à ce qu'il y ait un fond clair)
  • Enlever la solution excédentaire
  • Mettre le gel dans le four pour sécher (maximum 90 °C)
  • Evaluer le gel

13. Calibration

Pas d'application

14. Analyse des résultats

figure 2

Evaluer le gel par comparaison avec un profil de référence connu (contrôle).

15. Calcul

Pas d'application.

16. Imprécision

Pas d'application

17. Gamme de référence

Pas d'application.

18. Interférences

Pas connu

19. Contrôle de qualité

Utiliser un échantillon de contrôle

20. Références

1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme, Italy, June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system  Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988

Brochures:

B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.

B 25a E97

B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.

B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.

B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.

B 39a E96

B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.

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