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ANALIS

Protur™HiSi kit for Beckman Coulter Paragon® Electrophoresis - PT:Instrução de manipulação

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DESCRIPTION
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1. General

Data: 4 Set-03 - Revisão: 01
EURO PN 844111009
PN 10-004100
100 testes por kit

figure 1

2. Utilização

O kit foi desenvolvido para a separação electroforética de proteínas em amostras de urina não concentradas.

3. Princípio do teste

As proteínas sob a acção de um campo eléctrico migram no sentido de um dos eléctrodos com diferentes velocidades. A migração separa as proteínas. Após a migração as proteínas são coradas com corante especial para interpretação visual pela comparação com uma referência conhecida (controle).

Um marcador (padrão interno) pode ser usado para posicionamento das fracções.

4. Conteúdo

Tampão de Equilíbrio (0.64 mol/L TRIS-borate buffer) 1x200mL (PN 10-004101)

Tampão de Electroforese (3.2mol/L TRIS-borate buffer) 1x200mL (PN 10-004102)

Protur Dye 1x100mL (PN 10-004064)

Gel Agarose: 1x10

Folhas Guia de Amostra - 1x10

Medida (25mL) 1x

Folhas Guia blotters 1x 10 (19 x 126 mm)

Blotters de Gel 1x 20 (83x101mm)

Quando é usado um marcador como padrão interno: adicione 5 µL de P.I. (padrão interno Referência 10-004109) a 100 µL de urina.

5. Configuração do instrumento

  • Veja o Sistema de Electroforese Paragon® Beckman Coulter.

6. Outros reagents e materiais necessários

  • Pipetas.
  • Proveta graduada.
  • Água desionizada.
  • Solução Ácido-álcool
  • Solução salina
  • Sistema de Electroforese Paragon® Beckman Coulter.

Quando usar padrão interno:

  • Marcador (Padrão Interno) 1mL Referência 10-004109

7. Treino

O operador deve estar familiarizado com o o Sistema de Electroforese Paragon® Beckman Coulter.

8. Preparação e armazenamento do reagente

Géis de Agarose: Antes de usar, com cuidado remova o Gel da sua embalagem. Os géis devem ser armazenados à temperatura ambiente, 18ºC a 30ºC, até à data de expiração. Temperatura ou condições de armazenamento impróprias poderão resultar em migrações atípicas. NÃO ARMAZENE OS GÉIS PERTO DE DISPOSITIVOS EMISSORES DE CALOR, por ex: CRT, computadores ou outros instrumentos de bancada. NÃO REFRIGERAR OU CONGELAR .

Tampão de Equilíbrio Protur HiSi : PRONTO A USAR.

Tampão de Electroforese Protur HiSi Misture 200mL de tampão com 800mL água desionizada.

O tampão é estável num contentor fechado durante 60 dias.

Solução Corante Protur:

- Prepare a solução ácido-álcool: 500 mL de água desionizada, 300 mL de metanol, 200 mL de ácido acético.

- Mistura 100 mL Dye com 200 mL de solução ácido-álcool .

Armazene os reagentes à temperatura ambiente

9. Tipo de amostra


Utilize urina fresca, não concentrada.

10. Preparação do instrumento

Veja o Sistema de Electroforese Paragon® Beckman Coulter .

Coloque no wet processor:

  • contentor 1: solução corante (staining solution)

  • contentor 2: água desionizada

  • contentor 3: solução ácido-álcool

  • contentor 4: solução ácido-álcool

  • contentor 5: água desionizada

REUTILIZÁVEL PARA 10 GÉIS

11. Preparação da amostra

Não é necessária preparação.

Quando é usado um marcador como padrão interno: adicione 5 µL de P.I. (padrão interno Referência 10-004109) a 100 µL de urina.

12. Operações

Equilíbrio

- Seque o gel e deite 20 mL de tampão de equilíbrio no Tabuleiro do Gel.

- Coloque o gel, com o lado da agarose para baixo.

- Aguarde 30 minutos (não feche o contentor)

Aplicação

- Seque o gel

- Coloque a folha guia de amostra

- Dispense a amostra: exactamente 5 µL

- Aguarde que toda a amostra se tenha difundido no gel.

- Remova e elimine a folha guia

Electroforese

- Deite 45 mL de tampão de electroforese em cada compartimento da tina

- Coloque o gel na ponte

- Separe durante 25 minutes a 100 volts

Coloração

- Proceda do seguinte modo:

o Solução corante (dye) 10 min.

o Água desionizada 10 min.

o Solução ácido-álcool 1 min.

o Solução ácido-álcool 1 min. (ou não mais até obter um fundo transparente)

o Retire o excesso de solução

- Coloque o gel na estufa de secagem até secar (máximo 90ºC).

- Avalie o gel.

13. Calibração

Não aplicável.

14. Análise dos resultados

figure 2

Avalie o gel por comparação com um padrão conhecido (controle).

15. Cálculos

Não aplicável.

16. Imprecisão

Não aplicável.

17. Gama de referência

Não aplicável.

18. Interferências

Desconhecidas.

19. Controle de qualidade

Use uma amostra de controle.

20. Referências

1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme , Italy , June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system  Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988

Brochuras:

B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.

B 25a E97

B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.

B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.

B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.

B 39a E96

B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.

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