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ANALIS

Microprotur™ kit for Beckman Coulter Paragon®Electrophoresis - FR: Manuel d'instruction

QUOTATION
INFORMATION
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DESCRIPTION
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1. General

Date: 4 sept-03 - Révision: 01
EURO PN 844111003
PN 10-004070
100 tests par kit

figure 1

2. Utilisation

Pour la séparation électrophorétique de protéines dans de l'urine non-concentrée.

3. Principe de test

Des protéines dans un champ électrique migrent à une vitesse différente vers l'un des pôles de l'électrode. La migration sépare les protéines. Après migration, les protéines sont colorées avec un colorant protéique spécifique pour l'interprétation visuelle et comparaison avec un profil de référence connu (contrôle).

4. Contenu

Tampon d'équilibration (1.33 mol/L tampon TRIS-borate) 1x200mL (PN 10-004061)

Tampn d'électrophorèse (2.22mol/Ltampon TRIS-borate) 1x200mL (PN 10-004062)

Colorant Protur 1x100mL (PN 10-004064)

Gels d'agarose: 10x

MicroProtur révélateur (20 mL) 10-004063

Matrices d'échantillon - 10

Liquipipette 2.5 mL

Mesure (25mL) 1x

Buvards pour matrices 10 (19 x 126 mm)

Buvards pour gels 40 (83x101mm)

Buvards séchants: 40 (76 x 101 mm)

5. Configuration de l'appareil

- Voir Beckman Coulter Paragon® Système d'électrophorèse

6. Autres réactifs et matériel nécessaires

  • Pipettes
  • Eprouvette graduée
  • De l'eau désionisée
  • Solution acide acétique/alcool
  • 10 % de solution d'acide acétique
  • Solution saline
  • Beckman Coulter Paragon® Système d'électrophorèse

7. Training

L'utilisateur doit bien connaître le système d'électrophorèse Paragon de Beckman Coulter.

8. Préparation et conservation des réactifs

Gels d'agarose: juste avant l'utilisation, retirer le gel de son emballage avec précaution. Les gels doivent être conservés à température ambiante de 18 °C à 30 °C, jusqu'à la date de préremption.

Le non-respect des conditions de température ou de conservation, peut aboutir à des migrations atypiques. NE PAS CONSERVER LES GELS A PROXIMITE D'APPAREILS QUI DIFFUSENT DE LA CHALEUR; p.ex. CRT, ordinateur ou appareil de table. NE PAS REFRIGERER NI CONGELER.

Protur tampon d'équilibration: PRÊT A L'EMPLOI

Protur tampon d'électrophorèse: mélanger 200mL de tampon avec 800mL d'eau désionisée. Le tampon est stable pendant 60 jours dans un récipient fermé.

Solution d'acide acétique 10%

Protur Dye: solution de colorant

- Préparer la solution d'acide acétique/alcool: 500 mL d'eau désionisée, 300 mL de méthanol, 200 mL d'acide acétique.

- Mélaner 100 mL de colorant avec 200 mL de solution d'acide acétique/alcool.

Solution saline

8.5 g NaCl dans 1 L d'eau désionisée.

Conserver les réactifs à température ambiante

9. Type spécimen

Utiliser de l'urine fraîche non-concentrée.


10. Mise en service du système

Voir Paragon® système d'électrophorèse

Mettre dans le processeur de rinçage:

· recipient 1: solution de colorant

· recipient 2: solution d'acide acétique

· recipient 3: solution d'acide acétique/alcool

· recipient 4: solution d'acide acétique/alcool

· recipient 5: eau désionisée

REUTILISABLE POUR 10 GELS

11. Préparation de l'échantillon

Diluer l'urine si la teneur totale en protéines est de plus de 500mg/L.

12. Procédure d'utilisation

Equilibration

- Sécher le gel et verser 20 mL de tampon d'équilibration dans le fond de la boîte plastique.

- Placer le gel, le côté agarose vers le bas, sur le liquide.

- Attendre 30 minutes (ne pas fermer le récipient)

Application

- Sécher le gel

- Positionner la matrice d'échantillon

- Pipetter un échantillon de 5 µl

- Attendre 5 minutes

- Sécher la matrice délicatement avec le buvard de matrice.

- Jeter buvard et matrice

Electrophorèse

- Verser 45 mL de tampon d'électrophorèse dans chaque compartiment de la cuve

- Placer le gel sur le support

- Effectuer une séparation à 100 volts pendant 35 min.

Détection

- Placer le gel dans la boîte d'incubation

- A l'aide de la liquipipette, appliquer de manière uniforme 2 mL de Protur Revealer sur le gel.

- Incuber à température ambiante pendant 30 min.

- Rincer 10 min. dans une solution saline

- Placer le buvard de gel sur le Press Dryer assembly

- Enlever le gel du support et le mettre, le côté d'agarose en haut, sur le buvard de gel qui se trouve sur le Press Dryer Base.

- Placer un deuxième buvard de gel, humidifié avec la solution saline, sur la surface du gel, suivi par 2 buvards à sécher et le plateau supérieur pour séchage tamponnant.

- Placer le poids de la presse sur l'ensemble et presser le gel pendant 10 min. pour sécher.

- Rincer 10 min. dans une solution saline fraîche.

- Sécher encore une fois pendant 10 min. à la même manière.

- Mettre le gel dans le four (maximum 90 °C) pour sécher.

- Traiter le gel comme suit:

o Solution de colorant 3 min.

o Solution d'acide acétique 2 min.

o Solution d'acide acétique/alcool 1 min.

o Solution d'acide acétique/alcool 15 sec. (ou plus long jusqu'à ce qu'il y ait un fond clair)

o Eau désionisée 5 sec.

o Enlever la solution excédentaire

- Mettre le gel dans le four pour sécher (maximum 90 °C)

- Evaluer le gel

13. Calibration

Pas d'application.

14. Analyse des résultats

Evaluer le gel par comparaison avec un profil de référence connu (contrôle).

15. Calcul

Pas d'application.

16. Imprécision

Pas d'application.

17. Gamme de référence

Pas d'application.

18. Interférences

Pas-connu.

19. Contrôle de qualité

Utiliser un échantillon de contrôle.

20. Références

1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme, Italy, June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system  Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988

Brochures:

B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.

B 25a E97

B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.

B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.

B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.

B 39a E96

B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.

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