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ANALIS

Protur™ Plus kit for Beckman Coulter Paragon® Electrophoresis - ES: Instrucciones de uso

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1. General

Fecha: 4-Sep-03 - Revisión: 01
EURO PN 844111007
PN 10-004090
10 pruebas por kit

figure 1

2. Uso previsto

Este estuche está diseñado para la inmunofijación de las proteínas en muestras no concentradas de orina.

3. Principio del ensayo

Cuando las proteínas se someten a un campo eléctrico, migran hacia uno de los polos en proporciones variables. La migración separa las proteínas. Cuando los antisueros específicos se combinan con sus proteínas específicas, tiene lugar una precipitación antígeno-anticuerpo.

El estuche Protur Plus™ incluye los reactivos para la separación electroforética de proteínas en muestras no concentradas de orina en gel tamponado de agarosa.

Después de la electroforesis se aplica el suero.

4. Contenido

Tampón Equilibrador (0,44 mol/l de tampón TRIS borato) 1x200ml (PN 10-004061)

Tampón Electroforético (2,22 mol/l de tampón TRIS borato) 1x200ml (PN 10-004062)

Tinción Protur 1x100ml (PN 10-004064)

Antisuero Protur Plus (Anti proteinas totales, IgG, IgA, microproteina, kappa, lambda) 6x0,8ml (PN 10-004091) (Contiene azida sódica)

Geles de agarosa: 10

Plantilla para la muestra 10

Plantilla para el antisuero 10

Medida (25ml) 1x

Secantes para plantillas 10 (19 x 126 mm)

Secantes para geles 50 (83x101mm)

Secantes absorbentes 40 (76 x 101 mm)

5. Configuración del aparato

- Véase el Sistema de electroforesis Beckman Coulter Paragon ®.

6. Otros reactivos y materiales necesarios

- Pipetas.

- Bureta graduada.

- Agua desionizada.

- Solución ácido-alcohol

- Solución salina

- Sistema de electroforesis Beckman Coulter Paragon ®.

7. Formación

El operador deberá estar familiarizado con el Sistema de electroforesis Beckman Coulter Paragon®.

8. Preparación de reactivos y almacenamiento

Geles de agarosa: Inmediatamente antes de usarlo, sacar el gel de su envoltorio de aluminio cuidadosamente. Los geles deben almacenarse a temperatura ambiente entre 8°C y 30°C hasta su fecha de caducidad. Una temperatura o condiciones de almacenamiento inadecuadas pueden ocasionar migraciones atípicas. No almacene los geles cerca de dispositivos que emitan calor, como por ejemplo monitores, ordenadores, o instrumentos de sobremesa. NO REFRIGERAR NI CONGELAR.

Tampón Equilibrador Protur: Plus™: Listo para usar.

Tampón de electroforesis Protur Plus™ Mezclar 200 ml de tampón con 800 ml de agua desionizada.

El tampón permanece estable en frasco cerrado durante 60 días.

Colorante Protur Plus™: Solución para tinción :

- preparar la solución ácido-alcohol: 500 ml de agua desionizada, 300 ml de metanol, 200 ml de ácido acético.

- mezclar 100 ml de colorante con 200 ml de solución ácido-alcohol.

Solución salina:

8,5 g de NaCl en 1 l de agua desionizada.

Almacenar los reactivos a temperatura ambiente.

9. Tipo de muestra


Utilizar orina fresca no concentrada.

10. Preparación del equipo

Véase el sistema de electroforesis Paragon ®

Colocar en el procesador de líquidos:

· contenedor 1: solución para la tinción (colorante)

· contenedor 2: agua desionizada

· contenedor 3: solución ácido alcohol

· contenedor 4: solución ácido alcohol

· contenedor 5: agua desionizada

reutilizable para 10 geles

11. Preparación de la muestra

La muestra no requiere ninguna preparación previa.

12. Operaciones

Equilibrado

  • Secar el gel y verter 20 ml de tampón equilibrador en la bandeja.
  • Colocar el gel, con la agarosa hacia abajo, sobre el líquido.
  • Esperar durante 30 minutos (no cerrar el contenedor)

Aplicación

  • Secar el gel
  • Colocar la plantilla para la muestra
  • Dispensar 5 µl de la muestra
  • Esperar durante 5 minutos
  • Secar suavemente la plantilla con el secante para plantillas
  • Retirar y desechar el secante y la plantilla

Electroforesis

  • Verter 45 ml de tampón de electroforesis en cada compartimiento de la celda
  • Colocar el gel sobre el puente
  • Separar durante 35 minutos a 100 voltios

Detección

  • Secar el gel
  • Colocar la plantilla para el antisuero
  • Dispensar 80 µl de antisuero
  • Colocar el gel en la caja de incubación
  • Cerrar la caja y dejar incubando a temperatura ambiente durante 30 min
  • Retirar el gel, colocarlo en un marco para geles y lavar en solución salina durante 10 minutos
  • Colocar el gel en el fondo de la secadora a presión (con el lado de la azarosa hacia arriba)
  • Coloque un secante para geles empapado en solución salina, seguido de dos secantes absorbentes y la pletina superior de la secadora a presión. Secar a presión durante 10 minutos.
  • repetir los pasos previos (lavado con solución salina y secado a presión)
  • Colocar el gel en el marco para geles y limpiar el exceso de solución
  • Colocar el gel en el horno de secado hasta que se seque (a 90ºC como máximo)
  • Procesar el gel como sigue:
  • solución colorante 3 min.
  • agua desionizada 2 min.
  • solución ácido-alcohol 1 min.
  • solución ácido-alcohol 15 seg ( o más, hasta obtener un fondo claro)
  • Limpiar el exceso de solución
  • Colocar el gel en el horno de secado hasta que se seque (a 90ºC como máximo)
  • Evaluar el gel

13. Calibrado

No aplicable.

14. Análisis de resultados

figure 2

Evaluar los precipitados que aparecen en el gel.

15. Cálculos

No hay que realizar ningún cálculo.

16. Imprecisión

No aplicable.

17. Límites de referencia

No aplicable.

18. Interferencias

Ninguna conocida.

19. Control de Calidad

Usar una muestra del control.

20. Referencias

1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme, Italy, June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system  Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988

Textos:

B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.

B 25a E97

B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.

B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.

B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.

B 39a E96

B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.

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