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ANALIS

Protur™ B.J. kit for Beckman Coulter Paragon® Electrophoresis - IT: Istruzioni per l'uso

QUOTATION
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DESCRIPTION
DESCRIPTION

1. General

Data: 4-Sett-03 - Revisione: 01
EURO PN 844111005
PN 10-004080
20 test per kit

figure 1

2. Finalità di utilizzo

Il kit è concepito per la fissazione immunologica delle proteine e delle proteine Bence Jones nell'urina non concentrata.

3. Principio del test

Le proteine in un campo elettrico migrano verso uno dei poli dell'elettrodo a velocità variabili. La migrazione separa le proteine. Quando antisieri specifici si combinano con proteine specifiche, avviene la precipitazione del complesso antigene-anticorpo.

Il kit Protur B.J.™ contiene componenti per la separazione elettroforetica su gel di agarosio tamponato delle proteine nell'urina non concentrata.

Al termine dell'elettroforesi viene aggiunto l'antisiero.

4. Contenuto

Tampone per equilibrazione(TRIS-borato 0,44 mol/L) 1x200 mL (PN 10-004061)

Tampone per elettroforesi (TRIS-borato 2,22 mol/L ) 1x200 mL (PN 10-004062)

Colorante Protur 1x100 mL (PN 10-004064)

Antisiero Protur Plus (anti-IgG, A, M- kappa, -lambda) 3 x 1,6 mL (PN 10-004081)

Contiene sodio azide

Gel di agarosio: 10

Mascherine per campioni 10

Mascherine per antisiero 10

Contenitore graduato (25 mL) 1x

Assorbenti per mascherina 10 (19 x 126 mm)

Assorbenti per gel 50 (83 x 101 mm)

Assorbenti per essiccazione 40 (76 x 101 mm)

5. Configurazione dello strumento

- Vedere sistema elettroforetico Paragon ® Beckman Coulter

6. Altri reagenti e materiale necessario

- Pipette.

- Cilindro graduato.

- Acqua deinizzata

- Soluzione alcool-acido

- Soluzione salina

- Sistema elettroforetico Paragon ® Beckman Coulter

7. Formazione

L'operatore deve conoscere il sistema elettroforetico Paragon di Beckman Coulter.

8. Preparazione dei reagenti e stoccaggio

Gel di agarosio: solo prima dell'uso rimuovere delicatamente il gel dal contenitore sigillato. I gel devono essere conservati a temperatura ambiente di 8°C a 30°C, fino alla data di scadenza. Temperature o condizioni di conservazione non adeguate possono causare migrazioni atipiche. NON CONSERVARE I GEL IN PROSSIMITÀ DI FONTI DI CALORE. Ad esempio: CRT, computer o strumentazione da banco. NON REFRIGERARE O CONGELARE.

Tampone di equilibrazione Protur Plus™: Pronto per l'uso.

Tampone per elettroforesi Protur Plus™ Miscelare 200 mL di tampone con 800 mL di acqua deionizzata.

Il tampone conservato in contenitore chiuso è stabile per 60 giorni.

Soluzione colorante Protur Plus™:

- Preparare la soluzione alcool-acido: 500 mL di acqua deionizzata, 300 mL di metanolo, 200 mL di acido acetico.

- Miscelare 100 mL di colorante e 200 mL di soluzione alcool-acido.

Soluzione salina:

8,5 g NaCl in 1 L di acqua deionizzata.

Conservare i reagenti a temperatura ambiente

9. Tipologia di campione


Utilizzare urina fresca non concentrata.

10. Preparazione dello strumento

Vedere sistema elettroforetico Paragon®.

Nella stazione contenimento reagenti disporre:

· contenitore 1: soluzione colorante

· contenitore 2: acqua deionizzata.

· contenitore 3: soluzione alcool-acido

· contenitore 4: soluzione alcool-acido

· contenitore 5: acqua deionizzata.

RIUTILIZZABILE PER 10 GEL

11. Preparazione del campione

Campione di urina fresca.

12. Operazioni

Equilibrazione

- Asciugare il gel

- Versare 20 mL di tampone per equilibrazione nel vassoietto gel.

- Posizionare il gel nel liquido, con il lato dell'agarosio rivolto verso il basso.

- Attendere 30 minuti (non chiudere il contenitore)

Applicazione

- Asciugare il gel

- Posizionare la mascherina campioni

- Dispensare 5 µL di campione

- Attendere 5 minuti

- Premere delicatamente con le dita sul materiale assorbente della mascherina

- Rimuovere e smaltire il materiale assorbente e la mascherina

Elettroforesi

- Versare 45 mL di tampone per elettroforesi in ciascun comparto della cella elettroforetica.

- Posizionare il gel sul ponte

- Separare per 35 minuti a 100 volt

Rilevamento

- Asciugare il gel

- Posizionare la mascherina antisiero

- Applicare 80 µL di antisiero

- Disporre il gel nel contenitore di incubazione

- Chiudere il contenitore e incubare a temperatura ambiente per 30 minuti

- Rimuovere il gel, posizionarlo nella cornice e lavarlo con soluzione salina per 10 minuti

- Disporre il gel sulla base dell'asciugatore a pressione (lato agarosio verso l'alto)

- Posizionare un secondo strato di materiale assorbente inumidito con soluzione salina sulla superficie del gel, seguito da 2 strati di assorbente per essiccazione, quindi dalla piastra superiore dell'asciugatore. Asciugare a pressione per 10 minuti.

- Ripetere il passaggio precedente

- Disporre il gel nella cornice e asciugare la soluzione in eccesso

- Posizionare il gel nel forno per l'essiccazione (max. 90°C) per completare l'asciugatura.

- Trattare il gel con:

o soluzione colorante 3 minuti

o acqua deionizzata 2 minuti

o soluzione alcool-acido 1 minuto

o soluzione alcool-acido 15 secondi ( o più a lungo, finché non si ottiene uno sfondo chiaro)

o acqua deionizzata 5 secondi

o Asciugare la soluzione in eccesso

- Posizionare il gel nel forno per l'essiccazione (max. 90°C) per completare l'asciugatura.

- Valutare il gel

13. Calibrazione

Non applicabile.

14. Analisi dei risultati

figure 2

Valutare il gel in base alle precipitazioni.

15. Calcolo

Non sono necessari calcoli.

16. Imprecisione

Non applicabile.

17. Range di riferimento

Non applicabile.

18. Interferenze

Nessuna conosciuta.

19. Controllo Qualità

Utilizzare urina di controllo.

20. Riferimenti

1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme, Italy, June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system  Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988

Brochure:

B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.

B 25a E97

B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.

B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.

B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.

B 39a E96
B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.

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