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Date: 4 sep-03 - Révision 01
EURO PN 844111005
PN 10-004080
20 tests par kit
Le kit s'utilise pour l'immunofixation de protéines et de protéines de Bence Jones dans l'urine non-concentrée.
Des protéines dans un champ électrique migrent à une vitesse différente vers l'un des pôles de l'électrode. La migration sépare les protéines. Lorsque des antisérums spécifiques se combinent avec des protéines spécifiques, il se produira une précipitation antigène-anticorps.
Le kit Protur B.J.™ contient des composés pour la séparation électrophorétique de protéines dans l'urine non-concentrée dans un gel d'agarose tamponné.
Après l'électrophorèse on applique un antisérum.
Tampon d'équilibration (0.44 mol/L tampon TRIS-borate) 1x200mL (PN 10-004061)
Tampon d'électrophorèse (2.22mol/L tampon TRIS-borate) 1x200mL (PN 10-004062)
Colorant Protur 1x100mL (PN 10-004064)
Antisérum Protur Plus (Anti- IgG, A, M - kappa, -lambda) 3x1.6mL (PN 10-004081)
Contient de l'azide.
Gels d'agarose : 10
Matrice d'échantillon: 10
Matrice d'antisérum: 10
Contenu (25mL): 1x
Buvards pour matrice: 10 (19 x 126 mm)
Buvards pour gel: 50 (83x101mm)
Buvards séchants: 40 (76 x 101 mm)
5. Configuration de l'appareil |
- Voir Beckman Coulter Paragon® Système d'Electrophorèse.
6. Autres réactifs et matériel nécessaires |
- Pipettes
- Eprouvette graduée
- Eau distillée
- Solution d'alcool acide
- Solution saline
- Beckman Coulter Paragon® Système d'Electrophorèse
L'utilisateur doit bien connaître le système d'électrophorèse Paragon de Beckman Coulter.
8. Préparation et conservation des réactifs |
Gels d'agarose: juste avant l'utilisation, retirer le gel de son emballage avec précaution. Les gels doivent être conservés à température ambiante de 18 °C à 30 °C, jusqu'à la date de préremption.
Le non-respect des conditions de température ou de conservation, peut aboutir à des migrations atypiques. NE PAS CONSERVER LES GELS A PROXIMITE D'APPAREILS QUI DIFFUSENT DE LA CHALEUR; p.ex. CRT, ordinateur ou appareil de table. NE PAS REFRIGERER NI CONGELER.
Protur Plus™ Tampon d'équilibration: PRÊT A L'EMPLOI
Protur Plus™ Tampon d'électrophorèse: mélanger 200mL de tampon avec 800mL d'eau désionisée. Le tampon est stable pendant 60 jours dans un récipient fermé.
Protur Plus™ Dye: solution de colorant
- Préparer la solution d'alcool acide: 500 mL d'eau désionisée, 300 mL de méthanol, 200 mL d'acide acétique.
- Mélanger 100 mL de colorant avec 200 mL de solution d'alcool acide.
Solution saline
8.5 g NaCl dans 1 L d'eau désionisée.
Conserver les réactifs à température ambiante
Utiliser de l'urine fraîche non-concentrée.
10. Mise en service du système |
Voir Paragon® système d'électrophorèse
Mettre dans le processeur de rinçage:
· recipient 1: solution de colorant
· recipient 2: eau déionisée
· recipient 3: solution d'alcool acide
· recipient 4: solution d'alcool acide
· recipient 5: eau désionisée 5 sec.
REUTILISABLE POUR 10 GELS
11. Préparation de l'échantillon |
Un échantillon d'urine fraîche
12. Procédure d'utilisation |
Equilibration
- Sécher le gel et verser 20 mL de tampon d'équilibration dans le fond de la boîte plastique.
- Placer le gel, le côté agarose vers le bas, sur le liquide.
- Attendre 30 minutes (ne pas fermer le récipient)
Application
- Sécher le gel
- Positionner la matrice d'échantillon
- Pipetter un échantillon de 5 µl
- Attendre 5 minutes
- Presser doucement avec le bout des doigts sur le buvard de matrice.
- Jeter buvard et matrice
Electrophorèse
- Verser 45 mL de tampon d'électrophorèse dans chaque compartiment de la cuve
- Placer le gel sur le support
- Effectuer une séparation à 100 volts pendant 35 min
Détection
- Sécher le gel
- Placer la matrice d'antisérum
- Appliquer 80 µL d'antisérum
- Placer le gel dans la boîte d'incubation
- Fermer la boîte et incuber à température ambiante pendant 30 min.
- Enlever le gel, le mettre dans le support de gel et le rincer pendant 10 min. dans la solution saline.
- Placer le gel sur le Press Dryer Base (côté d'agarose en haut)
- Placer un deuxième buvard de gel, humidifié avec la solution saline, sur la surface du gel, suivi par 2 buvards à sécher et le plateau supérieur pour séchage tamponnant. Appuyer pendant 10 minutes pour sécher.
- Répéter l'étape précédente
- Placer le gel dans le support et enlever la solution excédentaire
- Mettre le gel dans le four pour sécher (maximum 90 °C)
- Traiter le gel avec:
o Solution de colorant 3 min.
o Eau désionisée 2 min.
o Solution d'alcool acide 1 min.
o Solution d'alcool acide 15 sec. (ou plus long jusqu'à ce qu'il y ait un fond clair)
o Eau désionisée
o Enlever la solution excédentaire
- Mettre le gel dans le four pour sécher (maximum 90 °C)
- Evaluer le gel
Pas d'application
14. Analyse des résultats |
Contrôler les gels sur la présence de précipitation.
Pas nécessaire
Pas d'application
Pas d'application
Pas connu.
Utiliser un échantillon de contrôle d'urine.
1. Chopin N. Exploration biologique des protéinuries. Classification, méthodes d'investigation et interprétation. Spectra Biologie 1993;1:49-53
2. Chopin N, Le Carrer D. Etude de la sélectivité des protéinuries : description d'un nouvel index. Rev Fr Lab 1994;269:103-7
3. Chopin N, Le Carrer D. Exploration biologique des tubulopathies : mise à jour. Rev Fr Lab 1994;269:109-12
4. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. L'analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Rev Fr Lab 1992;245:41-7
5. Le Carrer D, Chopin N. Profil protéique urinaire : proposition d'un protocole d'exploration biologique des protéinuries. Rev Fr Lab 1994;269:29-37
6. Pourignaux F, Brohet M, Louis P, Chevigné R. News methods for detecting and identifying monoclonal and BJ proteins in urine without concentration. Sixth Int Symp of Nephrology, Montecatini Terme, Italy, June 1989
7. Van Hoof V, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L. Evaluation of the Protur/Microprotur system Beckman-Analis-Belgium for the protein electrophoresis of non-concentrated urine samples. 7ieme Coll Biologie Prospective, Pont à Mousson, 1988
Brochures:
B 25 E92 Analysis of Urinary Proteins by Electrophoresis without Concentration.
B 25a E97
B 46 D95 Urinproteinelektrophorese von nicht einkonzentrierten Urinproben.
B 38 F94 L'analyse des protéines urinaires par électrophorèse sans concentration.
B 39 E94 Urinary Proteins analysis by electrophoresis without concentration.
B 39a E96
B 45 D95 Elektrophoretische Urinproteinanalyse ohne Einkonzentrierung.
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