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ANALIS

CEofix™ SPE kit for Beckman Coulter P/ACE™ MDQ series - FR: Manuel d'instruction

QUOTATION
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DESCRIPTION
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1. General

Date: 23 novembre 05 - Revision: 0

EURO PN A26217

ANALIS PN 10-004750

100 tests par trousse.

2. Utilisation prévue

Le kit est destiné à la séparation électrophorétique des protéines sériques humaines sur le Beckman Coulter P/ACE MDQ.

3. Principe du test

Les protéines sériques sont séparées dans un capillaire sous l'influence d'un champ électrique. Des différences du rapport charge à masse résultent en des temps de migration différents.
Les protéines sont détectées à 214 nm par un détecteur monté sur le capillaire.

Signification Clinique: La séparation électrophorétique des protéines sériques est une technique universelle de tri des protéines servant à détecter les gammopathies monoclonales et pour aider au diagnostic des états physiopathologiques associés à des modifications de concentration des protéines.

4. Contenu

Conditioner 1 x 50 mL Sodium Hydroxide 0.2 mol/L (PN. 10-004751))
Buffer 1 x 60 mL TRIS/Taurine buffer, pH 9.7 (PN 10-004752)
Rinse 1 x 45 mL Aqua bidistillata (PN 10-004753)
Initiator 1 x 14 mL Tris buffer, pH 9.7 (PN 10-004754)

5. Configuration de l'instrument

-Electrophorèse capillaire: BeckmanCoulter P/ACE MDQ

-Détectuer UV à filtre (214nm) et refroidissement de l'échantillon.

-Logiciel P/ACE 32 Karat version 5.0 ou 7.0.
Utiliser la configuration sans l'intégration CAESAR.

6. Autre matériel

- Fioles 2 mL (PN 144980)

- Bouchons rouges (PN 144648)

- Microfioles de 500 µL( PN 970668) pour les échantillons et bouchons blue (PN 144649)

- Assemblage de cartouches à blanc 100 x 800 µm (PN 144738)

- Pipettes

- Capillaire 25µM ID x 30 cm longueur totale (EuroPN: 844111023 or PN 10-004788)

7. Formation

L'opérateur doit connaître le fonctionnement et l'entretien de l'instrument (P/ACE MDQ).

8. Préparation et stockage des réactifs

Les réactifs sont prêts à l'emploi. Veuillez stocker le kit et les tampons dans des conteneurs fermés entre 8°C et 30°C jusqu'à la date d'expiration.

Entre les fonctionnements, les fioles des tampons doivent être rebouchés pour éviter toute évaporation.

Si le kit arrive endommagé, veuillez demander son remplacement.

Le kit ne contient pas de composants dangereux.

9. Type déchantillon

Les fluides biologiques sont prélevés comme il est usuel pour tous les tests de laboratoire clinique.

Un sérum fraîchement prélevé sur un individu à jeun est préférable.

10. Préparation de l'instrument

figure 1


1. .

figure 2

2.

figure 3

3.

figure 4

4.

figure 5

5.

figure 6

6.

figure 7

7.

figure 8

8.

figure 9

9. Peak / Group Tables - UV - 214 nm / Use area percent

Name

ID</

Mig. Time

MT Window

Ref. ID #

EOF

1

1.7

0.06

38

EOF

2

1.75

0.06

38

EOF

3

1.8

0.06

38

EOF

4

1.85

0.06

38

EOF

5

1.9

0.06

38

gamma

6

1.95

0.06

38

gamma

7

2

0.06

38

gamma

8

2.05

0.06

38

gamma

9

2.1

0.06

38

gamma

10

2.15

0.06

38

gamma

11

2.2

0.06

38

gamma

12

2.25

0.06

38

gamma

13

2.3

0.06

38

beta

14

2.35

0.06

38

beta

15

2.4

0.06

38

beta

16

2.45

0.06

38

beta

17

2.5

0.06

38

beta

18

2.55

0.06

38

beta

19

2.6

0.06

38

alpha 2

20

2.65

0.06

38

alpha 2

21

2.7

0.06

38

alpha 2

22

2.75

0.06

38

alpha 2

23

2.8

0.06

38

alpha 2

24

2.85

0.06

38

alpha 2

25

2.9

0.06

38

alpha 2

26

2.95

0.06

38

alpha 2

27

3

0.06

38

alpha 2

28

3.05

0.06

38

alpha 2

29

3.1

0.06

38

alpha 1

30

3.15

0.06

38

alpha 1

31

3.2

0.06

38

alpha 1

32

3.25

0.06

38

alpha 1

33

3.3

0.06

38

alpha 1

34

3.35

0.06

38

albumin

35

3.4

0.06

38

albumin

36

3.45

0.06

38

albumin

37

3.5

0.06

38

albumin

38

3.55

1

0

albumin

39

3.6

0.06

38

albumin

40

3.65

0.06

38

albumin

41

3.7

0.06

38

albumin

42

3.75

0.06

38

albumin

43

3.8

0.06

38

albumin

44

3.85

0.06

38

albumin

45

3.9

0.06

38

albumin

46

3.95

0.06

38

albumin

47

4

0.06

38

albumin

48

4.05

0.06

38

albumin

49

4.1

0.06

38

albumin

50

4.15

0.06

38

albumin

51

4.2

0.06

38

albumin

52

4.25

0.06

38

albumin

53

4.3

0.06

38

albumin

54

4.35

0.06

38

albumin

55

4.4

0.06

38

albumin

56

4.45

0.06

38

albumin

57

4.5

0.06

38

Peaks can be grouped by name by entering in the  Group Def. (+)

Name

Ref. ID#

ISTD.ID#

Groupe Type

Group Def.

Unit

Analysis Channel

Quantitation

EOF

0

0

Named Peaks

(+)

UV - 214nm

Area

gamma

0

0

Named Peaks

(+)

UV - 214nm

Area

beta

0

0

Named Peaks

(+)

UV - 214nm

Area

alpha2

0

0

Named Peaks

(+)

UV - 214nm

Area

alpha1

0

0

Named Peaks

(+)

UV - 214nm

Area

albumin

0

0

Named Peaks

(+)

UV - 214nm

Area

ou télécharger le programme:
spe.met ( 32 Karat Software 7.0)

Flamber les extrémités du capillaire pour éliminer le revêtement polyimide sur 2 mm.

11. Préparation de l'échantillon

Utilisez du sérum frais non dilué, placez de 200 à 400 µL dans une micro fiole, placer un bouchon bleu et introduisez l'échantillon dans le portoir d'échantillon de droite dans le MDQ.

12. Manipulations

Manipulations journalières:

- Nettoyer l'instrument et le manifold de l'interface
- Mettre en place des nouvelles fioles de rinçage, conditionneur, initiateur et tampon.
- Mettre en place des bouchons propres et secs sur les fioles.
- Faire tourner les programme  cond_spe.met lorsque le système est resté à l'arrêt pendant plusieurs jours (voir méthode).
- Préparez 200 à 400 µL de sérum dans des micro fioles et placer dans l'instrument.
- Faire tourner le programme  spe.met  .
Fin de la journée:

- Enlever les échantillons
- Enlevez et jetez les fioles tampon (buffer, conditionner, rinse, initiator).
Placement d'un nouveau capillaire

-Lorsque le capillaire est cassé ou ne fonctionne pas correctement, remplacer le capillaire selon les instructions de l'instrument.
-Faire tourner le programme "cond_spe.met pour le conditionnement.

13. Calibration

Le kit n'exige pas de calibrage.

L'instrument doit être entretenu et calibré suivant les spécifications de Beckman Coulter.

14. Analyse des résultats

voir exemple

L'intégration, temps de migration et attributions des pics peuvent être adapté pour un regroupement adéquat des pics.

15. Calcul

Aucun calcul n'est nécessaire pour l'interprétation visuelle qualitative de l'électrophorèse capillaire des protéines sériques (SPE), lorsque vous comparez les électrophérogrammes à une structure de référence connue ou à un contrôle disponible dans le commerce.
Le logiciel de l'instrument calcule le pourcentage relatif de chaque fraction de protéine.

16. Imprécision

Two normal samples and one abnormal sample was run according to "NCCLS EP5-A Preliminary Precisions Test"

N=12 Mean and %CV

Gamma Beta Alpha 2 Alpha 1 Albumine
Normal 1 13.80
3.15
7.52
1.83
13.44
1.35
5.01
2.47
59.80
1.03
Normal 2 6.96
4.39
7.77
2.64
13.10
1.22
5.54
4.79
65.37
0.77
High gamma 23.77
2.06
8.9
3.74
12.85
2.36
4.69
3.42
49.08
1.19

17. Résultats

L'analyse de laboratoire clinique SPE est une procédure de dépistage. L'interprétation de l'électrophérogramme SPE doit toujours être effectuée en conjonction avec une évaluation clinique car le résultat SPE n'a pas de caractère spécifique ou diagnostic par lui-même. Il est recommandé d'effectuer l'électrophorèse par immunofixation (IFE)pour écarter ou confirmer la présence d'une immunoglobuline monoclonale.

Intervalles de références:

Chaque laboratoire doit établir sa propre plage de référence en fonction de la population de patients.

Pour une population normale nous avons obtenus:

Protein fraction 95% Lower Limit (90% CI) 95% Upper Limit (90% CI)
Gamma 8.1 (7.3 - 8.9) 15.6 (14.6 - 16.4)
Beta 6.9 (6.8 - 7.6) 11.6 (11.2 - 13.9)
Alpha 2 9.1 (6.3 - 10.7) 16.7 (16.0 - 19.4)
Alpha 1 3.4 (2.6 - 3.6) 7.2 (6.9 - 7.4)
Albumine 53.7 (53.3 - 55.3) 64.6 (63.8 - 65.6)

18. Interférence

- Un échantillon de plasma produira un pic de fibrinogène dans la région des gamma.

- Une concentration élevée d'hémoglobine peut interférer dans la région Alpha 2 et Beta.

- Des échantillons ayant une concentration élevée de lipides peuvent altérer les électrophérogrammes.

- Des échantillons prélevés après injection intraveineurse de produits de contraste, de médicaments ou de "plasma expanders" et qui absorbent à 214 nm peuvent altérer les profils.

19. Contrôle qualité

Lors de chaque essai un contrôle doit être inclus. Ce contrôle peut être un mélange de sérums frais ou un contrôle de qualité disponible dans le commerce.

20. Références

References


- Chen, F.A., et al., Capillary Electrophoresis  A new clinical Tool, Clin.
Chem., 37(1) (19910
- Kim, J.W. et al., Quantitaive Analysis of Serum Proteins Separated by
Capillary Electrophoresis, Clin.Chem., 39:689 (1993)
- Bossuyt, X., et al., Serum protein electrophoresis by CZE 2000 clinical
capillary electrophoresis system., Clin. Chem. 44:4 749 (1998).
- Bossuyt, X., Separation of Serum Proteins by Automated Capillary Zone
Electrophoresis, Clin. Chem. Lab.Med., 41:6 762 (2003)
- Jenkins M. A., Quality control and quality assurance aspects of the routine
use of capillary electrophoresis for serum and urine proteins in clinical
laboratories, Electrophoresis 25, 1555 (2004).
- Joliff, C.R. Classification and Interpretation of Paragon Serum Protein
Electrophoresis Patterns, Beckman Coulter Technical Bulletin EP1,
Beckman Coulter, Fullerton, C.A.
- Ritchie, R.F., et al., Serum Proteins in Clincal Medicine Volume I
Laboratory Section Foundation for Blood Research PO Box 190,
Scarborough Maine USA.

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