Hi, I am an happy lightbox
|
|
|
|
|
|
|
|
++ 32 (0)81 25 50 50
EN | NL | FR LOGIN   
PRODUCTS SECTORS SERVICES BRANDS
PRODUCTS
SECTORS
SERVICES
BRANDS
   
ANALIS

Isoamyl™ kit for Beckman Coulter Paragon® Electrophoresis - NL: Gebruikershandleiding

QUOTATION
INFORMATION
QUOTATION
INFORMATION
DESCRIPTION TECHNICAL DESCR.
DESCRIPTION

REVISION 02

1. General
2. Gebruik
3. Testprincipe
4. Inhoud
5. Toestelconfiguratie
6. Andere vereiste reagentia en benodigdheden
7. Training
8. Bereiden en bewaren van de reagentia
9. Type specimen
10. Opstellen van de apparatuur
11. Staalvoorbereiding
12. Gebruiksaanwijzingen
13. Kalibratie
14. Analyse van de resultaten
15. Berekening
16. Onnauwkeurigheid en gevoeligheid
17. Referentiebereik
18. Interferentie
19. Kwaliteitscontrole
20. Referenties

1. General

Datum: 9 mei 2005 - Bewerking: 02
EURO PN 844111001
PN 10-004050
100 tests per kit

2. Gebruik

Voor de scheiding van α-amylase iso-enzymen in serum door agarose-gelelektroforese.

3. Testprincipe

De Isoamyl-kit bevat een boraatbuffer pH 6,95 voor de elektroforetische scheiding op agarosegels. Om de gekleurde fracties te verkrijgen gebruikt men een Phadebas® (Pharmacia Diagnostics) reagens als substraat.

Het substraat is een in water onoplosbaar cross-linked zetmeelpolymeer met een blauwe kleurstof. Het wordt gehydrolyseerd door α-amylase en vormt wateroplosbare blauwe fragmenten.

4. Inhoud

Elektroforesebuffer: (trisboraat 1.5 mol/L) 2x200mL (PN 10-004051)

Equilibratiebuffer (trisboraat 0.6 mol/L) 1x200mL (PN 10-00452)

Isoamyl Substraat(Phadebas® Pharmacia Diagnostics) 30 tabletten (PN 10-004053)

Agarosegel : 1x10

Inhoud 25 mL 1x

Plastic tang 1x

Liquipipette Graduat (3mL) 1x

Staaltemplate (purper) 1x10

Template blotters 1x10 (19x126mm)

Gel Blotters 20 (83 x 101 mm)

5. Toestelconfiguratie

-Beckman Coulter's Paragon® Electrophoresis System.

6. Andere vereiste reagentia en benodigdheden

- Pipetten

- Maatcilinder

- Gedesioniseerd water

- Beckman Coulter's Paragon® Electrophoresis System.

APPARAAT (OPTIONEEL)

Een densitometer die een film van 3 x 4 inch kan scannen bij 600 nm. Raadpleeg de gebruiksinstructies van de fabrikant voor de werkings- en kalibratieprocedures.

7. Training

De gebruiker moet vertrouwd zijn met Beckman Coulter's Paragon Electrophoresis System.

8. Bereiden en bewaren van de reagentia

Elektroforesebuffer Meng 400mL buffer met 600mL gedesioniseerd water.

De buffer is gedurende 60 dagen houdbaar in een gesloten recipiënt.

Substraat: 3 tabletten Phadebas® in 6 mL gedesioniseerd water.

9. Type specimen


De serumstalen worden gecollecteerd op de normale wijze voor een laboratoriumtest. Vers serum van een vastend individu verdient de voorkeur, maar de stalen kunnen gedurende 72 uur op 4 °C bewaard worden voor latere analyse. Gekoelde stalen moeten eerst gereactiveerd worden door een incubatie van 30 min. op 37 °C, voorafgaand aan de analyse. Gebruik geen stalen die hemolyse vertonen.

10. Opstellen van de apparatuur

Zie Paragon® Electrophoresis System.

HERBRUIKBAAR VOOR 10 GELS

11. Staalvoorbereiding

Serumstalen worden niet verdund.

12. Gebruiksaanwijzingen

Equilibratie

  • Blot de gel
  • Giet 20 mL equilibratiebuffer in het gelschaaltje (gebruiksklaar)
  • Plaats de gel, met de agarosekant naar beneden, op de vloeistof.
  • Wacht 30 minuten (recipiënt niet sluiten)

Toepassing

  • Blot de gel
    GEEN AMYLASE OP DE GEL AANBRENGEN MET VINGERS OF SPEEKSEL
  • Plaats de staaltemplate
    Kijk naar de afbeelding voor een correcte alignering van de template.

figure 2

  • Pipetteer een staal van 5 µL
    (stalen met een amylaseactiviteit van meer dan 2x de hoogste waarde moeten korter aangebracht worden: 1 tot 3 min.)
  • Wacht 5 minuten
  • Blot de template voorzichtig met de template blotter
  • Blotter en template wegwerpen

Elektroforese

  • Giet 45 mL elektroforesebuffer in elk compartiment van de cel
  • Plaats de gel op de drager
  • Voer gedurende 50 min. een scheiding uit bij 150 volt

Detectie

  • Plaats de gel in de incubatiekamer
  • Met de liquipipette de suspensie van 3 tabletten substraat in 6 mL gedesioniseerd water, gelijkmatig aanbrengen op de gel.
  • Sluit de kamer
  • Incubeer gedurende een uur op 45°C zonder de kamer te bewegen
  • Spoel de gel onder de waterkraan.

13. Kalibratie

De werking van de densitometer moet nagegaan worden conform de instructies van de fabrikant.

14. Analyse van de resultaten

De structuur van het amylase iso-enzym kan visueel geïnterpreteerd worden op de natte gel of nat gescand worden met een densitometer bij 600 nm om het relatieve percentage van elk amylase iso-enzym te kennen.

15. Berekening

Op basis van de totale amylaseactiviteit kan men de fracties herberekenen.

Bijvoorbeeld:

Totale activiteit 35 U/L

P2 fractie van 12 % geeft 4U/L

S2 fractie van 58 % geeft 20U/L

S2 fractie van 27 % geeft 10U/L

S4 fractie van 3 % geeft 1U/L

16. Onnauwkeurigheid en gevoeligheid

Als N=10 en amylase = 84 U/L

Intra-gel

Inter-gel

U/L

%CV

U/L

%CV

P2

18.1

1.4

18.4

3.8

S2

46.4

2.1

46.6

2.9

S3

16.1

3.5

15.9

9.1

S4

3.3

14.6

3.3

20.3

De gevoeligheid biedt fractiedetectie met een activiteit van slechts 1 U/L.

17. Referentiebereik

Elk laboratorium zou een eigen referentiebereik moeten opstellen in overeenstemming met de patiëntenpopulatie.

Referentiewaarden opgesteld op basis van 1300 gezonde individuen:

Totale amylaseactiviteit (*)

24 U/L

72 U/L

P2

9

32

P3

0

2

S2

7

42

S3+S4

1

6

(*) de totale amylaseactiviteit werd bepaald op 25°C met Wako reagentia.

18. Interferentie

Niet gekend.

19. Kwaliteitscontrole

Het is aanbevolen normale verse sera of commercieel beschikbare kwaliteitscontrolesera te gebruiken bij elke elektroforetische procedure.

20. Referenties

Bibliografie

Van Hoof V, Michielsen P, Roelandt R et al.

Evaluation of the Isoamyl system and its application in a prospective study of serum amylase after endoscopy. Biologie Prospective. Comptes rendus du 7ième colloque de Pont-à-Mousson,1989:261-4

Van Hoof V, Geeraerts L, Van Meirvenne H, Van Mullem M, Chevigné R, Van Campenhout C, Lepoutre L.

Reference Values for Amylase Isoenzymes Determined by Agarose Electrophoresis. Clin Chem 1990;36:1151-2.

Michielsen P, Van Hoof V, Lepoutre L, Van Maercke Y.

Klinische Toepassingen van de Isoamylasenbepaling. Tijdschr. voor Geneeskunde 1990;46:1251-6

Analis Brochures:

B 53 E9702 α-Amylase Isoenzymes separation by agarose gel electrophoresis.

B 54 D9703 Trennung der α-Amylase-Isoenzyme auf Agarosegelen.

TECHNICAL DESCR.
ANALIS website
This item belongs to the following categories (click to expand):
Prices are quoted in euro (taxes excluded) and apply in the Benelux (recycling fee included). They are subject to change without notice. We reserve the right to adjust pricing errors and to limit quantities.

FOLLOW US ON  FOLLOW US: