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ANALIS

CEofix™ HbA2 kit for Beckman Coulter P/ACE™ MDQ series - ES: Instrucciones de uso

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100 pruebas por kit

1. Fecha: 1 7-12-03 - Revisión: 01

figure 1

2. Uso previsto:

El kit ha sido diseñado para la determinación cuantitativa de hemoglobina humana A2 (HbA2), para la determinación de hemoglobina F y de las variantes de la hemoglobina. Para la determinación de las variantes de la hemoglobina, el kit deberá utilizarse en combinación con el kit CEofix™ HbA1c .


3. Principio del ensayo:

Las hemoglobinas se separan en el interior de un tubo capilar bajo la influencia de un campo eléctrico. Diferencias en la proporción carga/masa dan lugar a diferentes velocidades de migración.

Se utiliza un detector UV que detecta las hemoglobinas a 415nm.

El kit comprende los tampones y el método. Los tampones usan la técnica patentada de doble recubrimiento dinámico.

El % de HbA2 se define como el porcentaje de fracción HbA2 respecto a la suma de todas las fracciones de la hemoglobina.

4. Contenido:

Codigo de lote 050315 y más alto

Lavados:
1 x 45ml de agua bidestilada (PN 10-004713)
Acondicionador:
1 x 20ml de NaOH 0.2 M (PN 10-004711)
Iniciador:
1 x 15 ml de Ácido Málico, Arginina pH 4.6
(PN 10-004714)
Tampón:
1 x 45 ml de Taurina Arginina pH 8,9 (PN 10-004712)
Hemolizador:
1 x 15 ml de Taurina Arginina pH 9,0 (PN 10-004715)

Codigo de lote 031205

Lavados:
1 x 10 ml de agua bidestilada (PN 10-004713)
Acondicionador:
1 x 10ml de NaOH 0.2 M (PN 10-004711)
Iniciador:
1 x 3 ml de Ácido Málico, Arginina pH 4.6

(PN 10-004714)

Tampón:
1 x 10 ml de Taurina Arginina pH 8,9 (PN 10-004712)
Hemolizador:
1 x 15 ml de Taurina Arginina pH 9,0 (PN 10-004715)

5. Configuración del aparato:


- BeckmanCoulter P/ACE MDQ

  • Detector UV con filtro de 415 nm (PN: 10-004709)
  • Opción de refrigeración de la muestra
  • Versión 5.0 del software 32 Karat para el sistema P/ACE

(use la configuración sin integrar CAESAR)

6. Otros materiales necesarios:


- Viales de 2 ml (PN 144980)

  • Tapones (PN 144648)
  • Microplacas
  • Unidad de Cartucho de Blanco 100 x 800 µm (PN 144738)
  • Pipetas
  • Tubo capilar de 25 µm ID x 10 cm para el detector, de 31 cm de longitud total (PN 10-004748/844111023)


7. Formación:

El operador deberá estar familiarizado con el funcionamiento del aparato (P/ACE MDQ) y su mantenimiento.

8. Preparación de reactivos y almacenamiento:



Los reactivos están listos para ser utilizados. Almacene el kit y los tampones en recipiente cerrado, entre 8°C y 30°C hasta cuando indique la fecha de caducidad.

Cambiar todos los días los viales de tampón.

Si el kit suministrado presenta algún deterioro, deberá solicitarse la sustitución del mismo.

El kit no contiene sustancias peligrosas.

9. Tipo de muestra:

Los líquidos biológicos deberán ser recogidos según la técnica empleada normalmente para cualquier análisis clínico de laboratorio.

La muestra idónea es un hemolizado de sangre total.

10. Preparación del equipo:

Cargue el equipo como se muestra a continuación

figure 2

Programación del equipo

figure 3

Queme los extremos del tubo capilar para eliminar la capa de poliimida en 2 mm.

11. Preparación de la muestra:

Muestra: Mezcla de 150 µl de hemolizador + 30 µl de sangre total bien resuspendida en una microplaca.

figure 4

12. Operaciones:

Operaciones diarias:

  • limpie el equipo y la interfaz varias veces
  • coloque los viales de líquido de lavado, del acondicionador, del tampón iniciador
  • coloque los tapones limpios y secos sobre los viales con tampón
  • ejecute  cond.met
    cuando el sistema haya estado varios días sin funcionar

figure 5

- prepare las muestras

- coloque la muestra en el equipo

- ejecute el método

 HbA2_meth_96well_plate.met

Al final de la jornada:

- retire las muestras

- retire los viales que contienen tampón

Colocación de un nuevo tubo capilar

- Cuando se rompa un tubo capilar o cuando el tubo capilar no funcione correctamente,
sustituya el tubo capilar, de acuerdo con el manual del aparato

- Ejecute  cond.met"para el acondicionamiento

13. Calibrado:

El kit no necesita ningún calibrado.

El aparato deberá mantenerse y calibrarse siguiendo las especificaciones del Beckman Coulter.

14. Análisis de resultados:

Haga clic para ver unos ejemplos.

Click to see examples.

15. Cálculos:

% de HbA2 = área corregida de la fracción HbA2 respecto a la suma de las áreas corregidas de todas las fracciones de hemoglobina.


16. Imprecisión:

HbA2 Migration Time HbA2
mean: 6.08 min
Migration Time HbA
mean: 6.60
% HbA2
mean 2.82
Within-run assay (N=46) %CV

0.74 0.73 3.34

17. Límites de referencia:

Cada laboratorio deberá establecer sus propios límites de referencia de acuerdo con la población de pacientes.

figure 6

HbF < 1%

18. Interferencias:
  • La presencia de variantes de la hemoglobina limitará la determinación de la HbA2.
  • Para la determinación de las variantes de la hemoglobina, el kit deberá utilizarse en combinación con el kit CEofix HbA1c.

19. Control de Calidad:

En cada ensayo deberá incluirse un pool de sueros control o un control comercial.

20. Referencias:

1. Cotton F, Lin C, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Evaluation of a Capillary
Electrophoresis Method for Routine Determination of Hemoglobins A2 and F. Clin Chem
1999;45:237-43
2. Lin C, Cotton F, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Capillary zone electrophoresis: an
additional technique for identification of hemoglobin variants. Hemoglobin 1999;23:97-109
3. Gerritsma J, Sinnige D, Drieze C, Sittrop B, Houtsma P, Hulshorst-Jansen N and Huisman W.
Quantitative and qualitative analysis of haemoglobin variants using capillary zone
electrophoresis. Ann Clin Biochem 2000;37:380-9
4. Mario N, Baudin B, Bruneel A, Janssens J, Vaubourdolle M. Capillary Zone Electrophoresis for
the Diagnosis of Congenital Hemoglobinopathies. Clin Chem 1999;45:285-8
Bibliography
1. Castagnola M, Messana I, Cassiano L, Rabino R, Rossetti D, Giardina B. The use of capillary
electrophoresis for the determination of hemoglobin variants. Electrophoresis 1995;16:1492-8
2. Hempe J, Craver R. Quantification of hemoglobin variants by capillary isoelectric focusing. Clin
Chem 1994;40:2288-95
3. Hempe J, Granger J, Craver R. Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants in the
pediatric clinical laboratory. Electrophoresis 1997;18:1785-95
4. Hempe J, Granger J, Warrier R, Craver R. Analysis of hemoglobin variants by capillary
isoelectric focusing. J Cap Elec 1997;4:131-5
5. Hempe J, Craver R. Separation of hemoglobin variants with similar charge by capillary
isoelectric focusing : Value of isoelectric point for identification of common and uncommon
hemoglobin variants. Electrophoresis 2000;21:743-48
6. Jenkins M, Hendy J, Smith I. Evaluation of hemoglobin A2 quantification assay and hemoglobin
variant screening by capillary electrophoresis. J Cap Elec 1997;004:137-43
7. Landers J. Clinical capillary electrophoresis. Clin Chem 1995;41:495-509
8. Lin C, Gulbis B, Delobbe E, Cotton F, Vertongen F. Separation of human globin chains by
micellar electrokinetic capillary chromatography. J Chromatogr B 1998;719:47-54
9. Lukens J, Lee R. Hereditary disorders affecting hemoglobin structure and synthesis. Wintrobe's
Clinical Hematology, Ninth Edition 1993;1:1023-145
10. Mario N, Baudin B, Aussel C, Giboudeau J. Capillary isoelectric focusing and high-performance
cation-exchange chromatography compared for qualitative and quantitative analysis of
hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:2137-42
11. Mohammad A et al. Clinical application of capillary isoelectric focusing on fused silica capillary
for determination of hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:1798-9
12. Molteni S, Frischknecht H, Thormann W. Application of dynamic capillary isoelectric focusing to
the analysis of human hemoglobin variants. Electrophoresis 1994;15:22-30
13. Oda R, Clark R, Katzmann J, Landers J. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the
analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis 1997;18:1715-23
14. Ong C, Liau L, Ong H. Separation of globins using free zone capillary electrophoresis. J
Chromatogr 1992;576:346-50
15. Shihabi Z, Hinsdale M, Daugherty H. Hemoglobin A2 quantification by capillary zone
electrophoresis. Electrophoresis 2000;21:749-52
16. Sugano M et al. Analysis of hemoglobin and globin chain variants by a commonly used capillary
isoelectric focusing method. Electrophoresis 2000;21:3016-9.
17. Weykamp C, Penders T, Muskiet F, van der Slik W. Influence of hemoglobin variants and
derivatives on glycohemoglobin determinations, as investigated by 102 laboratories using 16
methods. Clin Chem 1993;39:1717-23

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