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ANALIS

CEofix™ HbA2 kit for Beckman Coulter P/ACE™ MDQ series - IT: Istruzioni per l'uso

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100 tests per kit

1. Data: 10-Apr-03 - Revisione: 01

figure 1

2. Finalità di utilizzo:

Il kit è indicato per la determinazione quantitativa dell'emoglobina umana A2 (HbA2), la determinazione dell'emoglobina F e delle varianti di emoglobina. Per le varianti di emoglobina il kit deve essere usato in combinazione con il kit CEofix™ HbA1c.


3. Principio del test:

Le emoglobine vengono separate, all'interno di un capillare, dall'influsso di un campo elettrico. Le differenti proporzioni di carica e massa producono tempi diversi di migrazione.

Viene impiegato un rilevatore a raggi UV che misura i Tf a 415nm.

Il kit è composto da tamponi e procedure. I tamponi utilizzano la tecnica brevettata del doppio rivestimento dinamico.

La % di HbA2 è definite come la percentuale della frazione di HbA2 in relazione alla somma di tutte le frazioni di emoglobina.

4. Contenuto:

For Lot 050315 and higher

Risciacquo:
1 x 45ml acqua bidistillata (PN 10-004713)
Condizionatore:
1 x 20 ml NaOH 0.2 M (PN 10-004711)
Iniziatore:
1 x 15 ml acido Malico, Arginina pH 4.6

(PN 10-004714)

Tampone:
1 x 45 ml Taurina/ Arginina pH 8.9 (PN 10-004712)
Emolizzatore:
1 x 15 ml Taurina/Arginina pH 9.0 (PN 10-004715)

Codice del lotto 031205

Risciacquo:
1 x 10 ml acqua bidistillata (PN 10-004713)
Condizionatore:
1 x 10 ml NaOH 0.2 M (PN 10-004711)
Iniziatore:
1 x 3 ml acido Malico, Arginina pH 4.6

(PN 10-004714)

Tampone:
1 x 10 ml Taurina/ Arginina pH 8.9 (PN 10-004712)
Emolizzatore:
1 x 15 ml Taurina/Arginina pH 9.0 (PN 10-004715)

5. Configurazione dello strumento:


- BeckmanCoulter P/ACE MDQ

  • Rilevatore UV con filtro 415 nm (PN: 10-004709)
  • Opzione con raffreddamento del campione
  • Software Karat P/ACE 32 versione 5.0

(utilizzare la configurazione senza l'integrazione CAESAR)

6. Altro materiale necessario:


- Fiale 2 ml (PN 144980)

  • Tappi (PN 144648)
  • Microtiterplate
  • Cartuccia vuota assemblata 100 x 800 µm (PN 144738)
  • Pipette
  • Capillare 25 µM ID x 10 cm al rilevatore 31 cm lunghezza totale (PN 10-004748/844111023)


7. Formazione:

L'operatore deve avere dimestichezza sia nell'operare con lo strumento (P/ACE MDQ) sia nella sua manutenzione.

8. Preparazione dei reagenti e stoccaggio:



I reagenti sono pronti all'uso. Conservare il kit e i tamponi, in una confezione chiusa, tra i 8 e i 30°C non oltre la data di scadenza.

Sostituire tutti i giorni le fiale tamponi.

Qualora pervenga un kit danneggiato si raccomanda di richiederne la sostituzione.

Il kit non contiene componenti pericolosi.

9. Tipologia di campione:

I fluidi biologici devono essere raccolti con le metodologie normalmente usate per ogni test di laboratorio clinico.

Il campione più indicato è il sangue intero emolizzato.

10. Preparazione dello strumento:

Caricare lo strumento come segue

figure 2

Programmazione dello strumento

figure 3

Bruciare l'estremità del capillare per eliminare il rivestimento in poliimmide 2 mm.

11. Preparazione del campione:

Campione: versare150 µl di emolizzatore + 30 µl di sangue intero ben mescolato in un microtiterplate e mescolare.

figure 4

12. Operazioni:

Operazioni giornaliere:

  • pulire lo strumento e inserire il collettore
  • immettere una fiale di risciacquo, condizionatore, iniziatore e tampone
  • chiudere le fiale tampone con tappi puliti e asciutti
  • lanciare  cond.met quando il sistema non è stato

in funzione per diversi giorni

figure 5

- preparare i campioni

- posizionare il campione nello strumento

- lanciare  HbA2_meth_96well_plate.met

Fine giornata:

- rimuovere i campioni

- rimuovere le fiale tamponi

Sostituzione del capillare

- Sostituire il capillare quando questi è rotto o presenta malfunzionamenti: seguire il manuale.

- lanciare  cond.met" per condizionamento

13. Calibratura:

Il kit non necessita di alcuna taratura.

Lo strumento deve essere calibrato e conservato secondo quanto specificato da Beckman Coulter.

14. Analisi dei risultati:

Clicca per vedere alcuni esempi.

Click to see examples.

15. Calcolo:

% HbA2 = area corretta della frazione di HbA2 in relazione con la somma delle aree corrette di tutte le frazioni di emoglobina.


16. Imprecisioni:

HbA2 Migration Time HbA2
mean: 6.08 min
Migration Time HbA
mean: 6.60
% HbA2
mean 2.82
Within-run assay (N=46) %CV

0.74 0.73 3.34

17. Range di riferimento:

Ogni laboratorio dovrebbe stabilire un proprio range di riferimento conformemente alla popolazione di pazienti.

figure 6

HbF < 1%

18. Interferenze:
  • La presenza delle varianti di emoglobina limiterà la determinazione di HbA2.
  • Per la determinazione delle varianti di emoglobina il kit dovrebbe essere
    utilizzato in combinazione con il kit CEofix HbA1c.

19. Controllo Qualità:

Il controllo integrato fornito o altro controllo disponibile sul mercato deve essere incluso in ogni programma.

20. Referenze:

1. Cotton F, Lin C, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Evaluation of a Capillary
Electrophoresis Method for Routine Determination of Hemoglobins A2 and F. Clin Chem
1999;45:237-43
2. Lin C, Cotton F, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Capillary zone electrophoresis: an
additional technique for identification of hemoglobin variants. Hemoglobin 1999;23:97-109
3. Gerritsma J, Sinnige D, Drieze C, Sittrop B, Houtsma P, Hulshorst-Jansen N and Huisman W.
Quantitative and qualitative analysis of haemoglobin variants using capillary zone
electrophoresis. Ann Clin Biochem 2000;37:380-9
4. Mario N, Baudin B, Bruneel A, Janssens J, Vaubourdolle M. Capillary Zone Electrophoresis for
the Diagnosis of Congenital Hemoglobinopathies. Clin Chem 1999;45:285-8
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1. Castagnola M, Messana I, Cassiano L, Rabino R, Rossetti D, Giardina B. The use of capillary
electrophoresis for the determination of hemoglobin variants. Electrophoresis 1995;16:1492-8
2. Hempe J, Craver R. Quantification of hemoglobin variants by capillary isoelectric focusing. Clin
Chem 1994;40:2288-95
3. Hempe J, Granger J, Craver R. Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants in the
pediatric clinical laboratory. Electrophoresis 1997;18:1785-95
4. Hempe J, Granger J, Warrier R, Craver R. Analysis of hemoglobin variants by capillary
isoelectric focusing. J Cap Elec 1997;4:131-5
5. Hempe J, Craver R. Separation of hemoglobin variants with similar charge by capillary
isoelectric focusing : Value of isoelectric point for identification of common and uncommon
hemoglobin variants. Electrophoresis 2000;21:743-48
6. Jenkins M, Hendy J, Smith I. Evaluation of hemoglobin A2 quantification assay and hemoglobin
variant screening by capillary electrophoresis. J Cap Elec 1997;004:137-43
7. Landers J. Clinical capillary electrophoresis. Clin Chem 1995;41:495-509
8. Lin C, Gulbis B, Delobbe E, Cotton F, Vertongen F. Separation of human globin chains by
micellar electrokinetic capillary chromatography. J Chromatogr B 1998;719:47-54
9. Lukens J, Lee R. Hereditary disorders affecting hemoglobin structure and synthesis. Wintrobe's
Clinical Hematology, Ninth Edition 1993;1:1023-145
10. Mario N, Baudin B, Aussel C, Giboudeau J. Capillary isoelectric focusing and high-performance
cation-exchange chromatography compared for qualitative and quantitative analysis of
hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:2137-42
11. Mohammad A et al. Clinical application of capillary isoelectric focusing on fused silica capillary
for determination of hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:1798-9
12. Molteni S, Frischknecht H, Thormann W. Application of dynamic capillary isoelectric focusing to
the analysis of human hemoglobin variants. Electrophoresis 1994;15:22-30
13. Oda R, Clark R, Katzmann J, Landers J. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the
analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis 1997;18:1715-23
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16. Sugano M et al. Analysis of hemoglobin and globin chain variants by a commonly used capillary
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