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CEofix™ HbA2 kit for Beckman Coulter P/ACE™ MDQ series - FR: Manuel d'instruction

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100 tests par kit

1. Date : 17-12-03 - Révision : 01

figure 1

2. Utilisation prévue:

Le kit est prévu pour la détermination quantitative d'hémoglobine A2 humaine (HbA2), la détermination de l'hémoglobine F et de variantes d'hémoglobine. Pour les variantes d'hémoglobine, le kit doit être utilisé en combinaison avec le kit CEofix™ HbA1c.


3. Principe du test:

Les hémoglobines sont séparées dans un capillaire sous l'influence d'un champ électrique. Des différences dans le rapport charge à masse résultent en des temps de migration différents.

On utilise un détecteur UV avec une détection des hémoglobines à 415nm.

Le kit est constitué de tampons et d'instructions. Les tampons utilisent la technique brevetée du double revêtement dynamique.

Le % de HbA2 est défini comme le pourcentage de la fraction de HbA2 par rapport à la somme de toutes les fractions d'hémoglobine.

4. Contenu:

Pour n° Lot 050315 et plus

Solution de rinçage:
1 x 45 mL eau bidistillée (PN 10-004713)
Solution de conditionnement:
1x 20mL NaOH 0.2 M (PN 10-004711)
Solution d'initiation:
1x 15 mL Acide malique, Arginine pH 4.6

(PN 10-004714)

Tampon:
1 x 45 mL Taurine/Arginine pH 8.9 (PN 10-004712)
Solution d'hémolyse:
1 x 15 mL Taurine/Arginine pH 9.0 (PN 10-004715)

Pour n° Lot 031205

Solution de rinçage:
1 x 10 mL eau bidistillée (PN 10-004713)
Solution de conditionnement:
1x 10mL NaOH 0.2 M (PN 10-004711)
Solution d'initiation:
1x 3 mL Acide malique, Arginine pH 4.6

(PN 10-004714)

Tampon:
1 x 10 mL Taurine/Arginine pH 8.9 (PN 10-004712)
Solution d'hémolyse:
1 x 15 mL Taurine/Arginine pH 9.0 (PN 10-004715)

5. Configuration de l'instrument:


- Beckman Coulter P/ACE MDQ

  • Détecteur UV avec filtre 415 nm (PN : 10-004709)
  • Option refroidissement de l'échantillon
  • Logiciel P/ACE 32 Karat version 5.0

(utiliser la configuration sans l'intégration CAESAR)

6. Autre matériel nécessaire:


- Fioles 2 mL (PN 144980)

  • Bouchons (PN 144648)
  • Plaque de microtitration
  • Assemblage de cartouches à blanc 100 x 800 µm (PN 144738)
  • Pipettes
  • Capillaire 25 µM DI x 10 cm vers le détecteur, longueur totale 31 cm (PN 10-004748/844111023)


7. Formation:

L'opérateur doit connaître le fonctionnement et l'entretien de l'instrument (P/ACE MDQ).

8. Préparation et stockage des réactifs:



Les réactifs sont prêts à l'emploi. Veuillez stocker le kit et les tampons dans des conteneurs fermés entre 8°C et 30°C jusqu'à la date d'expiration.

Remplacer quotidiennement les tampons, solutions de rinçage, de conditionnement et d'initiateur.

Si le kit arrive endommagé, veuillez demander son remplacement.

Le kit ne contient pas de composants dangereux.

9. Type d'échantillon:

Les fluides biologiques sont prélevés comme il est usuel pour tous les tests de laboratoire clinique.

Un hémolysat de sang complet est l'échantillon préféré.

10. Préparation de l'instrument:

Charger l'instrument comme suit

figure 2

Programmation de l'instrument

figure 3

ou downloader le programme: HbA2_meth_96well_plate.met

Flamber les extrémités du capillaire pour éliminer le revêtement polyimide sur 2 mm.

11. Préparation de l'échantillon:

Echantillon : 150 µL de solution d'hémolyse + 30 µL de sang complet bien mélangé dans une plaque de microtitration et mélanger.

figure 4

12. Manipulations:

Manipulations journalières:

  • nettoyer l'instrument et le manifold de l'interface
  • mettre en place les fioles de rinçage, conditionneur, initiateur et tampon
  • mettre en place des bouchons propres et secs sur les fioles
  • Faire tourner les programme  cond.met
    lorsque le système est resté à l'arrêt pendant plusieurs jours

figure 5

- préparer les échantillons

- placer l'échantillon dans l'instrument

- Faire tourner le programme  HbA2_meth_96well_plate.met

Fin de la journée:

- enlever les échantillons

- enlever les fioles de tampon

Placement d'un nouveau capillaire

- Lorsque le capillaire est cassé ou ne fonctionne pas correctement,

remplacer le capillaire selon les instructions de l'instrument.

- Faire tourner le programme  cond.met" pour le conditionnement

13. Calibrage:

Le kit n'exige pas de calibrage

L'instrument doit être entretenu et calibré suivant les spécifications de Beckman Coulter.

14. Analyse des résultats:

Cliquer pour voir des exemples.

Click to see examples.

15. Calcul:

% HbA2= surface corrigée de la fraction HbA2 par rapport à la somme des surfaces corrigées de toutes les fractions d'hémoglobines.


16. Imprécision:

HbA2 Migration Time HbA2
mean: 6.08 min
Migration Time HbA
mean: 6.60
% HbA2
mean 2.82
Within-run assay (N=46) %CV

0.74 0.73 3.34

17. Plage de référence:

Chaque laboratoire doit établir sa propre plage de référence en fonction de la population de patients.

figure 6

HbF < 1%

18. Interférence:
  • La présence de variantes d'hémoglobine limite la détermination de HbA2.
  • Pour la détermination de variantes d'hémoglobine, le kit doit être utilisé
    en combinaison avec le kit CEofix HbA1c.

19. Contrôle qualité:

Un contrôle devra être présent lors de chaque essai.

20. Références:

1. Cotton F, Lin C, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Evaluation of a Capillary
Electrophoresis Method for Routine Determination of Hemoglobins A2 and F. Clin Chem
1999;45:237-43
2. Lin C, Cotton F, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Capillary zone electrophoresis: an
additional technique for identification of hemoglobin variants. Hemoglobin 1999;23:97-109
3. Gerritsma J, Sinnige D, Drieze C, Sittrop B, Houtsma P, Hulshorst-Jansen N and Huisman W.
Quantitative and qualitative analysis of haemoglobin variants using capillary zone
electrophoresis. Ann Clin Biochem 2000;37:380-9
4. Mario N, Baudin B, Bruneel A, Janssens J, Vaubourdolle M. Capillary Zone Electrophoresis for
the Diagnosis of Congenital Hemoglobinopathies. Clin Chem 1999;45:285-8
Bibliography
1. Castagnola M, Messana I, Cassiano L, Rabino R, Rossetti D, Giardina B. The use of capillary
electrophoresis for the determination of hemoglobin variants. Electrophoresis 1995;16:1492-8
2. Hempe J, Craver R. Quantification of hemoglobin variants by capillary isoelectric focusing. Clin
Chem 1994;40:2288-95
3. Hempe J, Granger J, Craver R. Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants in the
pediatric clinical laboratory. Electrophoresis 1997;18:1785-95
4. Hempe J, Granger J, Warrier R, Craver R. Analysis of hemoglobin variants by capillary
isoelectric focusing. J Cap Elec 1997;4:131-5
5. Hempe J, Craver R. Separation of hemoglobin variants with similar charge by capillary
isoelectric focusing : Value of isoelectric point for identification of common and uncommon
hemoglobin variants. Electrophoresis 2000;21:743-48
6. Jenkins M, Hendy J, Smith I. Evaluation of hemoglobin A2 quantification assay and hemoglobin
variant screening by capillary electrophoresis. J Cap Elec 1997;004:137-43
7. Landers J. Clinical capillary electrophoresis. Clin Chem 1995;41:495-509
8. Lin C, Gulbis B, Delobbe E, Cotton F, Vertongen F. Separation of human globin chains by
micellar electrokinetic capillary chromatography. J Chromatogr B 1998;719:47-54
9. Lukens J, Lee R. Hereditary disorders affecting hemoglobin structure and synthesis. Wintrobe's
Clinical Hematology, Ninth Edition 1993;1:1023-145
10. Mario N, Baudin B, Aussel C, Giboudeau J. Capillary isoelectric focusing and high-performance
cation-exchange chromatography compared for qualitative and quantitative analysis of
hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:2137-42
11. Mohammad A et al. Clinical application of capillary isoelectric focusing on fused silica capillary
for determination of hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:1798-9
12. Molteni S, Frischknecht H, Thormann W. Application of dynamic capillary isoelectric focusing to
the analysis of human hemoglobin variants. Electrophoresis 1994;15:22-30
13. Oda R, Clark R, Katzmann J, Landers J. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the
analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis 1997;18:1715-23
14. Ong C, Liau L, Ong H. Separation of globins using free zone capillary electrophoresis. J
Chromatogr 1992;576:346-50
15. Shihabi Z, Hinsdale M, Daugherty H. Hemoglobin A2 quantification by capillary zone
electrophoresis. Electrophoresis 2000;21:749-52
16. Sugano M et al. Analysis of hemoglobin and globin chain variants by a commonly used capillary
isoelectric focusing method. Electrophoresis 2000;21:3016-9.
17. Weykamp C, Penders T, Muskiet F, van der Slik W. Influence of hemoglobin variants and
derivatives on glycohemoglobin determinations, as investigated by 102 laboratories using 16
methods. Clin Chem 1993;39:1717-23

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