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ANALIS

HS CEofix™ HbA2 kit for Beckman Coulter P/ACE™ 5000 series - FR: Manuel d'instruction

QUOTATION
INFORMATION
QUOTATION
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DESCRIPTION TECHNICAL DESCR.
DESCRIPTION

100 tests par kit

1.Date : 7-May-03 - Révision : version 01

2. Utilisation prévue:

Le kit est prévu pour la détermination quantitative d'hémoglobine A2 humaine (HbA2), la détermination de l'hémoglobine F et de variantes d'hémoglobine. Pour les variantes d'hémoglobine, le kit doit être utilisé en combinaison avec le kit CEofix™ HbA1c (PN 10-004180/844111025).


3. Principe du test:

Les hémoglobines sont séparées dans un capillaire sous l'influence d'un champ électrique. Des différences dans le rapport charge à masse résultent en des temps de migration différents.

On utilise un détecteur UV avec une détection des hémoglobines à 415nm.

Le kit est constitué de tampons et d'instructions. Les tampons utilisent la technique brevetée du double revêtement dynamique.

Le % de HbA2 est défini comme le pourcentage de la fraction de HbA2 par rapport à la somme de toutes les fractions d'hémoglobine.

4. Contenu:

Solution de rinçage :1x100mL eau bidistillée (PN 10-004183)

Solution de conditionnement :1x100mL NaOH 0.2 M (PN 10-004181)

Solution d'initiation :1x 2.5 mL solution aqueuse (PN 10-004194)

Tampon :4 x 4.2 mL Taurine Arginine pH 8.9 (PN 10-004192)

Solution d'hémolyse : 1 x 5.2 mL Arginine (PN 10-004195)

Microfioles :130

5. Configuration de l'instrument:


-Beckman Coulter P/ACE 5000

-Détecteur UV avec filtre 415 nm (PN : 10-004709)

-Logiciel P/ACE station version 1.0.

6. Autre matériel nécessaire:

- Fioles (PN 358807)

- Bouchons (PN 359079)

- Ressort (PN 338488)

- Cartouche 100x800 µm ( PN 727610)

- Pipettes

- Capillaire 25µM DI x 20cm vers le détecteur, longueur totale 31 cm (PN 10-004188/844111023)


7. Formation:

L'opérateur doit connaître le fonctionnement et l'entretien de l'instrument (P/ACE 5000).

8. Préparation et stockage des réactifs:


Les réactifs sont prêts à l'emploi. Veuillez stocker le kit et les tampons dans des conteneurs fermés entre 8°C et 30°C jusqu'à la date d'expiration.

Entre les fonctionnements, les fioles des tampons doivent être rebouchés pour éviter toute évaporation.

Si le kit arrive endommagé, veuillez demander son remplacement.

Le kit ne contient pas de composants dangereux.

9. Type d'échantillon:

Les fluides biologiques sont prélevés comme il est usuel pour tous les tests de laboratoire clinique.

Un hémolysat de sang complet est l'échantillon préféré.

10. Préparation de l'instrument:

Charger l'instrument comme suit

figure 1

Programmation de l'instrument

figure 2

ou downloader le programme : HbA2.met

Montage du capilaire

figure 3

Flamber les extrémités du capillaire pour éliminer le revêtement polyimide sur 2 mm.

11. Préparation de l'échantillon:

Echantillon : 50 µL de solution d'hémolyse + 10 µL de sang complet bien mélangé dans une microfiole et mélanger.

figure 4

12. Manipulations:

Manipulations journalières :

- nettoyer l'instrument et le manifold de l'interface

- mettre en place des nouveaux fioles de rinçage, conditionneur, initiateur, tampon et déchets

- mettre en place des bouchons propres et secs sur les fioles des tampons

- Faire tourner les programme  cond1.met lorsque le système est resté à l'arrêt pendant plusieurs jours

- préparer les échantillons

- placer l'échantillon dans l'instrument

- Faire tourner le programme "HbA2.met

Fin de la journée :

- enlever les échantillons

- Reboucher les fioles de tampon

Placement d'un nouveau capillaire

-Lorsque le capillaire est cassé ou ne fonctionne pas correctement, remplacer le capillaire selon les instructions de l'instrument.

-Faire tourner le programme  cond1.met pour le conditionnement

13. Calibrage:

Le kit n'exige pas de calibrage

L'instrument doit être entretenu et calibré suivant les spécifications de Beckman Coulter.

14. Analyse des résultats:

Cliquer pour voir des exemples.

15. Calcul:

% HbA2 = surface corrigée de la fraction HbA2 par rapport à la somme des surfaces corrigées de toutefois les fractions d'hémoglobine.

16. Imprécision:

Imprecision

HbA2 HbA2 (2.9%) MT A2 (4.7 min)
Within-assay (N=20) %CV 1.4 2.3
Between-run (N=20 days) %CV 1.8 2.9

Analis May 1998

Correlation

figure 5

Fig. Comparison of Hb A2 quantification.
CZE and MAEC results (n 5 57); ( B), CZE and HPLC results (n 5 57)
Hb A2 CZE (%) = 1.233 Hb A2 HPLC - 0.2

figure 6

Fig. Comparison of Hb F values obtained with HPLC and CZE.
Hb FCZE (%) = 1.118 Hb FHPLC + 0.4

F. Cotton et al.: Clinical Chemistry 45, No. 2, 1999

17. Plage de référence:

Chaque laboratoire doit établir sa propre plage de référence en fonction de la population de patients.

HbA2:

figure 7

Hbf:

figure 8

18. Interférence:

-.La présence de variantes d'hémoglobine limite la détermination de HbA2.

- Pour la détermination de variantes d'hémoglobine, le kit doit être utilisé en combinaison avec le kit CEofix HbA1c.

19. Contrôle qualité:

Un contrôle devra être présent lors de chaque essai.

20. Références:

1 Cotton F, Lin C, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Evaluation of a Capillary

Electrophoresis Method for Routine Determination of Hemoglobins A2 and F. Clin Chem

1999;45:237-43

2 Lin C, Cotton F, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Capillary zone electrophoresis: an

additional technique for identification of hemoglobin variants. Hemoglobin 1999;23:97-109

3 Gerritsma J, Sinnige D, Drieze C, Sittrop B, Houtsma P, Hulshorst-Jansen N and Huisman W.

Quantitative and qualitative analysis of haemoglobin variants using capillary zone

electrophoresis. Ann Clin Biochem 2000;37:380-9

4 Mario N, Baudin B, Bruneel A, Janssens J, Vaubourdolle M. Capillary Zone Electrophoresis for

the Diagnosis of Congenital Hemoglobinopathies. Clin Chem 1999;45:285-8

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1 Castagnola M, Messana I, Cassiano L, Rabino R, Rossetti D, Giardina B. The use of capillary

electrophoresis for the determination of hemoglobin variants. Electrophoresis 1995;16:1492-8

2 Hempe J, Craver R. Quantification of hemoglobin variants by capillary isoelectric focusing. Clin

Chem 1994;40:2288-95

3 Hempe J, Granger J, Craver R. Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants in the

pediatric clinical laboratory. Electrophoresis 1997;18:1785-95

4 Hempe J, Granger J, Warrier R, Craver R. Analysis of hemoglobin variants by capillary

isoelectric focusing. J Cap Elec 1997;4:131-5

5 Hempe J, Craver R. Separation of hemoglobin variants with similar charge by capillary

isoelectric focusing : Value of isoelectric point for identification of common and uncommon

hemoglobin variants. Electrophoresis 2000;21:743-48

6 Jenkins M, Hendy J, Smith I. Evaluation of hemoglobin A2 quantification assay and hemoglobin

variant screening by capillary electrophoresis. J Cap Elec 1997;004:137-43

7 Landers J. Clinical capillary electrophoresis. Clin Chem 1995;41:495-509

8 Lin C, Gulbis B, Delobbe E, Cotton F, Vertongen F. Separation of human globin chains by

micellar electrokinetic capillary chromatography. J Chromatogr B 1998;719:47-54

9 Lukens J, Lee R. Hereditary disorders affecting hemoglobin structure and synthesis. Wintrobe's

Clinical Hematology, Ninth Edition 1993;1:1023-145

10 Mario N, Baudin B, Aussel C, Giboudeau J. Capillary isoelectric focusing and high-performance

cation-exchange chromatography compared for qualitative and quantitative analysis of

hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:2137-42

11 Mohammad A et al. Clinical application of capillary isoelectric focusing on fused silica capillary

for determination of hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:1798-9

12 Molteni S, Frischknecht H, Thormann W. Application of dynamic capillary isoelectric focusing to

the analysis of human hemoglobin variants. Electrophoresis 1994;15:22-30

13 Oda R, Clark R, Katzmann J, Landers J. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the

analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis 1997;18:1715-23

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16 Sugano M et al. Analysis of hemoglobin and globin chain variants by a commonly used capillary

isoelectric focusing method. Electrophoresis 2000;21:3016-9.

17 Weykamp C, Penders T, Muskiet F, van der Slik W. Influence of hemoglobin variants and

derivatives on glycohemoglobin determinations, as investigated by 102 laboratories using 16

methods. Clin Chem 1993;39:1717-23

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