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ANALIS

HS CEofix™ HbA2 kit for Beckman Coulter P/ACE™ 5000 series - ES: Instrucciones de uso

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DESCRIPTION TECHNICAL DESCR.
DESCRIPTION

100 pruebas por kit

1. Fecha:7-May-03-Revisión:01

2. Uso previsto:

El kit ha sido diseñado para la determinación cuantitativa de hemoglobina humana A2 (HbA2), para la determinación de hemoglobina F y de las variantes de la hemoglobina. Para la determinación de las variantes de la hemoglobina, el kit deberá utilizarse en combinación con el kit CEofix™ HbA1c (PN 10-004180/844111025)..


3. Principio del ensayo:

Las hemoglobinas se separan en el interior de un tubo capilar bajo la influencia de un campo eléctrico. Diferencias en la proporción carga/masa dan lugar a diferentes velocidades de migración.

Se utiliza un detector UV que detecta las hemoglobinas a 415nm.

El kit comprende los tampones y el método. Los tampones usan la técnica patentada de doble recubrimiento dinámico.

El % de HbA2 se define como el porcentaje de fracción HbA2 respecto a la suma de todas las fracciones de la hemoglobina.

4. Contenido:

Lavados:1 x 100ml de agua bidestilada (PN 10-004183)

Acondicionador:1 x 100ml de NaOH 0.2 M (PN 10-004181)

Iniciador:1 x 2,5 ml de Solución acuosa (PN 10-004194)

Tampón:4 x 4,2 ml de Taurina Arginina pH 8,9 (PN 10-004192)

Hemolizador:1 x 5,2 ml de Arginina (PN 10-004195)

Microviales:130

5. Configuración del aparato:


- BeckmanCoulter P/ACE 5000

- Detector UV con filtro de 415 nm (PN: 10-004709)

- Versión 1.0 del software para la estación P/ACE.

6. Otros materiales necesarios:


- Viales (PN 358807)

- Tapones (PN 359079)

- Muelle (PN 338488)

- Cartucho 100x800 µm ( PN 727610)

- Pipetas

- Tubo capilar de 25µm ID x20cm para el detector, 31 cm de longitud total (PN 10- 004188/844111023)


7. Formación:

El operador deberá estar familiarizado con el funcionamiento del aparato (P/ACE MDQ) y su mantenimiento.

8. Preparación de reactivos y almacenamiento:



Los reactivos están listos para ser utilizados. Almacene el kit y los tampones en recipiente cerrado, entre 8°C y 30°C hasta cuando indique la fecha de caducidad.

En los intervalos entre cada ensayo, los viales de tampón deberán taparse para evitar la evaporación.

Si el kit suministrado presenta algún deterioro, deberá solicitarse la sustitución del mismo.

El kit no contiene sustancias peligrosas.

9. Tipo de muestra:

Los líquidos biológicos deberán ser recogidos según la técnica empleada normalmente para cualquier análisis clínico de laboratorio.

La muestra idónea es un hemolizado de sangre total.

10. Preparación del equipo:

Cargue el equipo como se muestra a continuación

figure 1

Programación del equipo

figure 2

O descargue el programa:HbA2.met

figure 3

Queme los extremos del tubo capilar para eliminar la capa de poliimida en 2 mm.

11. Preparación de la muestra:

Muestra: Mezcla de 50 µl de hemolizador + 10 µl de sangre total bien resuspendida en un microvial.

figure 4

12. Operaciones:

Operaciones diarias:

- limpie el equipo y la interfaz varias veces

- coloque los viales de líquido de lavado nuevo, del acondicionador, del tampón iniciador

- coloque un vial nuevo para desechos

- coloque los tapones limpios y secos sobre los viales con tampón

- ejecute  cond1.met cuando el sistema haya estado varios días sin funcionar

- prepare las muestras

- coloque la muestra en el equipo

- ejecute el método  HbA2.met

Al final de la jornada:

- retire las muestras

- cierre los viales que contienen tampón

Colocación de un nuevo tubo capilar

- Cuando se rompa un tubo capilar o cuando el tubo capilar no funcione correctamente, sustituya el tubo capilar, de acuerdo con el manual del aparato

- Ejecute  cond1.met para el acondicionamiento

13. Calibrado:

El kit no necesita ningún calibrado.

El aparato deberá mantenerse y calibrarse siguiendo las especificaciones del Beckman Coulter.

14. Análisis de resultados:

Haga clic para ver unos ejemplos.

15. Cálculos:

% de HbA2 = área corregida de la fracción HbA2 respecto a la suma de las áreas corregidas de todas las fracciones de hemoglobina.

16. Imprecisión:

Imprecision

HbA2 HbA2 (2.9%) MT A2 (4.7 min)
Within-assay (N=20) %CV 1.4 2.3
Between-run (N=20 days) %CV 1.8 2.9

Analis May 1998

Correlation

figure 5

Fig. Comparison of Hb A2 quantification.
CZE and MAEC results (n 5 57); ( B), CZE and HPLC results (n 5 57)
Hb A2 CZE (%) = 1.233 Hb A2 HPLC - 0.2

figure 6

Fig. Comparison of Hb F values obtained with HPLC and CZE.
Hb FCZE (%) = 1.118 Hb FHPLC + 0.4

F. Cotton et al.: Clinical Chemistry 45, No. 2, 1999

17. Límites de referencia:

Cada laboratorio deberá establecer sus propios límites de referencia de acuerdo con la población de pacientes.

HbA2:

figure 7

HbF:

figure 8

18. Interferencias:

- La presencia de variantes de la hemoglobina limitará la determinación de la HbA2.

- Para la determinación de las variantes de la hemoglobina, el kit deberá utilizarse en combinación con el kit CEofix HbA1c.

19. Control de Calidad:

En cada ensayo deberá incluirse un pool de sueros control o un control comercial.

20. Referencias:

1 Cotton F, Lin C, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Evaluation of a Capillary

Electrophoresis Method for Routine Determination of Hemoglobins A2 and F. Clin Chem

1999;45:237-43

2 Lin C, Cotton F, Fontaine B, Gulbis B, Janssens J, Vertongen F. Capillary zone electrophoresis: an

additional technique for identification of hemoglobin variants. Hemoglobin 1999;23:97-109

3 Gerritsma J, Sinnige D, Drieze C, Sittrop B, Houtsma P, Hulshorst-Jansen N and Huisman W.

Quantitative and qualitative analysis of haemoglobin variants using capillary zone

electrophoresis. Ann Clin Biochem 2000;37:380-9

4 Mario N, Baudin B, Bruneel A, Janssens J, Vaubourdolle M. Capillary Zone Electrophoresis for

the Diagnosis of Congenital Hemoglobinopathies. Clin Chem 1999;45:285-8

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2 Hempe J, Craver R. Quantification of hemoglobin variants by capillary isoelectric focusing. Clin

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3 Hempe J, Granger J, Craver R. Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants in the

pediatric clinical laboratory. Electrophoresis 1997;18:1785-95

4 Hempe J, Granger J, Warrier R, Craver R. Analysis of hemoglobin variants by capillary

isoelectric focusing. J Cap Elec 1997;4:131-5

5 Hempe J, Craver R. Separation of hemoglobin variants with similar charge by capillary

isoelectric focusing : Value of isoelectric point for identification of common and uncommon

hemoglobin variants. Electrophoresis 2000;21:743-48

6 Jenkins M, Hendy J, Smith I. Evaluation of hemoglobin A2 quantification assay and hemoglobin

variant screening by capillary electrophoresis. J Cap Elec 1997;004:137-43

7 Landers J. Clinical capillary electrophoresis. Clin Chem 1995;41:495-509

8 Lin C, Gulbis B, Delobbe E, Cotton F, Vertongen F. Separation of human globin chains by

micellar electrokinetic capillary chromatography. J Chromatogr B 1998;719:47-54

9 Lukens J, Lee R. Hereditary disorders affecting hemoglobin structure and synthesis. Wintrobe's

Clinical Hematology, Ninth Edition 1993;1:1023-145

10 Mario N, Baudin B, Aussel C, Giboudeau J. Capillary isoelectric focusing and high-performance

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hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:2137-42

11 Mohammad A et al. Clinical application of capillary isoelectric focusing on fused silica capillary

for determination of hemoglobin variants. Clin Chem 1997;43:1798-9

12 Molteni S, Frischknecht H, Thormann W. Application of dynamic capillary isoelectric focusing to

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analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis 1997;18:1715-23

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methods. Clin Chem 1993;39:1717-23

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