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ANALIS

CEofix™ CDT kit for Beckman Coulter P/ACE™ MDQ - IT: Istruzioni per l'uso

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100 tests per kit

1. Data: 6-12-03-Revisione: 02

2. Finalità di utilizzo:

Il kit è indicato per la determinazione del Tf (transferrin isoform) umano e la determinazione quantitativa del CDT (carbohydrate deficient transferrin) all'interno del siero umano.


3. Principio del test:

I Tf vengono separati, all'interno di un capillare, dall'influsso di un campo elettrico. Le differenti proporzioni di carica e massa producono tempi diversi di migrazione.

Viene impiegato un rilevatore a raggi UV che misura i Tf a 200nm.

Il kit è composto da tamponi e procedure. I tamponi utilizzano la tecnica brevettata del doppio rivestimento dinamico.

Il CDT è dato dalla percentuale di 0-sialo Tf più 2-sialo Tf in relazione alla somma di tutti gli isoform Tf.

4. Contenuto:

Risciacquo:1 x 30 ml acqua bidistillata (PN 10-004743)

Condizionatore:1 x 40 ml NaOH 0.2 M (PN 10-004741)

Iniziatore:1 x 6 ml tampone TRIS/Phosphato pH 2.0 (PN 10-004764)

Tampone: 1 x 18 ml tampone TRISborato pH 8.5 (PN 10-004762)

Soluzione Fe:1 x 15 ml (PN 10-004765)

5. Configurazione dello strumento:


- BeckmanCoulter P/ACE MDQ

- Rilevatore UV e raffreddamento del campione

- Software Karat P/ACE 32 versione 5.0

(utilizzare la configurazione senza l'integrazione CAESAR)

6. Altro materiale necessario:


- Fiale 2 ml (PN 144980)

- Tappi (PN 144648)

- Microtiterplate (piastra per microtitoli)

- Cartuccia vuota assemblata 100 x 800 µm (PN 144738)

- Pipette

- Capillare 50µM ID x 40 cm al rilevatore (EuroPN: 844111044 o PN 10-004748)


7. Formazione:

L'operatore deve avere dimestichezza sia nell'operare con lo strumento (P/ACE MDQ) sia nella sua manutenzione.

8. Preparazione dei reagenti e stoccaggio:

I reagenti sono pronti all'uso. Conservare il kit e i tamponi, in una confezione chiusa, tra i 8 e i 30°C non oltre la data di scadenza.

Tra un'operazione e l'altra le fiale buffer devono essere tappate per evitare l'evaporazione.

Qualora pervenga un kit danneggiato si raccomanda di richiederne la sostituzione.

Il kit non contiene componenti pericolosi.

9. Tipologia di campione:

I fluidi biologici devono essere raccolti con le metodologie normalmente usate per ogni test di laboratorio clinico.

Si consiglia un campione di siero appena prelevato.

10. Preparazione dello strumento:

Caricare lo strumento come segue

figure 2

Programmazione dello strumento

figure 3

figure 9

figure 5

O scarica il programma: CDT_meth_96well_plate.met Bruciare l'estremità del capillare per eliminare il rivestimento in poliimmide 2 mm.

11. Preparazione del campione:

Campione: versare 150 µL di soluzione Fe + 50 µL di siero in una microfiala e mescolare.

figure 6

12. Operazioni:

Operazioni giornaliere:

- pulire lo strumento e inserire il collettore

- immettere un nuovo risciacquo, condizionatore, iniziatore, fiale tampone

- chiudere le fiale con tappi puliti e asciutti

- lanciare "cond.met quando il sistema non è stato in funzione per diversi giorni (Clicca per vedere la presentazione)

- preparare i campioni

- posizionare il campione nello strumento

- lanciare  CDT_meth_96well_plate.met

Fine giornata:

- rimuovere i campioni

- tappare le fiale

Sostituzione del capillare

-Sostituire il capillare quando questi è rotto o presenta malfunzionamenti: seguire il manuale.

-lanciare  cond.met per condizionamento

13. Calibratura:

Il kit non necessita di alcuna taratura.

Lo strumento deve essere calibrato e conservato secondo quanto specificato da Beckman Coulter.

14. Analisi dei risultati:

Clicca per vedere alcuni esempi.

15. Calcolo:

% CDT = somma della % di 0-Sialo Tf più % di 2-Sialo Tf.

% X-Sialo Tf = la corretta area del X-Sialo Tf in relazione alla somma di tutti gli isoform Tf.

(X= 0, 2, 3, 4, 5 o 6).

16. Imprecisioni:

Imprecision:

Sample

Control

Low

High

Low

High

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Asialo

Disialo

Mean

_

0.89

0.68

3.20

_

0.94

0.75

3.59

SD

_

0.06

0.12

0.12

_

0.06

0.07

0.13

CV

_

7.2

18.7

3.9

_

6.6

9.0

3.6

NCCLS EP5-A (N=80) Lanz C., Thormann W. University of Bern Switzerland on P/ACE MDQ

17. Range di riferimento:

Ogni laboratorio dovrebbe stabilire un proprio range di riferimento conformemente alla popolazione di pazienti.

figure 10

18. Interferenze:

- Varianti eterozigote Tf, quali Tf BC e Tf DC sono facilmente rilevabili osservando i due picchi di circa il 40% all'interno dell'area corretta.

- CRP, se presente sarà osservato prima del picco del 2-sialo Tf.

- Alcune gammapatie monoclonali o biclonali possono interagire nella regione Tf.

19. Controllo Qualità:

Il controllo integrato fornito o altro controllo disponibile sul mercato deve essere incluso in ogni programma.

20. Referenze:

1. Legros F. et al. Carbohydrate-deficient Transferrin Isoforms Measured by Capillary Zone Elelectrophoresis for Detection of Alcohol Abuse. Clin Chem 2002;48: 2177-2186

2. Lanz C. et al. Evaluation and optimization of capillary zone electrophoresis with different dynamic capillary coatings for the determination of carbohydrate-deficient transferrin in human serum. J Chromatogr A 2002; 979: 43-57

3. Legros F. et al. Use of Capillary Zone Electrophoresis for Differentiating Excessive from Moderate Alcohol Consumption. Clin Chem 2003;49:440-449

4. Lanz C, et al. Capillary zone electrophoresis with a dynamic double coating for analysis of carbohydrate-deficient transferrin in human serum. Precision performance and pattern recognition. J Chromatog A 2003;1013:131-474.

5. Ramdani B. et al.Analyte Comigrating with Trisialotransferrin during Capillary Zone Electrophoresis of Sera from Patients with Cancer. Clin Chem 2003;49:1854-1864

6. Carchon H. et al. Diagnosis of Congenital Disorders of Glycosylation by Capillary Zone Electrophoresis of Serum Transferrin. Clin. Chem 2004;50:101-111

7. Lanz C. et al. Capillary zone elctrophoresis with a dynamic double coating for analysis of carbohydrate-deficient transferrin in human serum: Impact of resolution between disialo- and trisialotransferrin on reference limites. Electrophoresis 2003;24: 4272-4281

8. Martello S. et al. Determination of carbohydrate deficient transferrin (CDT) with capillary electrophoresis: an inter laboratory comparison. Forensic Science International 2004; 141:153-157

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